AMPK调控绵羊肌内前体脂肪细胞分化及机制研究

发布时间：2020-06-18 22:59

【摘要】：肌内脂肪含量(IMF)的高低直接影响肉的嫩度、多汁性及风味。IMF含量受到了遗传、营养、环境等多种因素的共同影响。肌内脂肪前体细胞是研究肌内脂肪形成的良好模型。AMPK是细胞调节能量代谢最重要的酶之一,参与了糖、脂肪及蛋白质的代谢过程。本试验旨在研究AMPK在羔羊肌内脂肪前体细胞分化中的作用及机制。本试验取3日龄羔羊背最长肌,采用差速贴壁法分离肌束膜中原代细胞。改变AMPK与Wnt信号通路的活性并诱导细胞成脂分化,采用qRT-PCR和Western blotting方法检测脂肪细胞分化关键基因及蛋白的表达,应用油红O染色观察成熟脂肪细胞的油滴情况。试验结果如下:1、AMPK激活显著减少了油红的着色(P0.05),抑制了PPARγ、C/EBPα和aP2等关键基因的mRNA及蛋白含量(P0.01),而抑制AMPK活性则表现出相反的结果。2、激活Wnt信号通路活性显著抑制了肌内脂肪前体细胞的分化,并下调了PPARγ、C/EBPα和aP2等基因的表达,而抑制Wnt信号通路活性则促进了细胞的成脂分化。3、AMPK的活性变化未影响β-catenin的转录,但显著改变了 β-catenin的蛋白表达(P0.05)。4、进一步研究表明,AMPK活化后显著增加了 GSK3β的磷酸化水平(P0.01),降低了其活性。综上所述,AMPK通过改变GSK3β的活性影响胞内β-catenin稳定性,进而影响羔羊肌内脂肪前体细胞的成脂分化。
【学位授予单位】：山西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S826
【图文】：

ｌ．ｌ脂肪细胞定向阶段逡逑多种细胞因子参与了脂肪细胞的定向分化阶段调控，包括Ｗｎｔｓ，ＧＡＴＡ和ＡＰ－ｌ等。逡逑Ｗｎｔｓ是一种调控细胞生长和细胞命运的旁分泌和自分泌因子家族，超过１６种分泌逡逑糖蛋白［１４］，Ｗｎｔ信号可维持前体脂肪细胞的不分化状态，在前脂肪细胞中抑制Ｗｎｔ信号逡逑会导致自发分化，表明前脂肪细胞产生的内源性Ｗｎｔ信号是一种有效的分化抑制因子。逡逑Ｗｎｔ信号抑制脂肪细胞分化是通过减少ＰＰＩｙ和Ｃ／ＥＳＰｃｉ的表达。此外，Ｗｎｔ通路的激逡逑活减弱了棕色脂肪标记基因ｔ／ＣＰｉ和辅激活因子ＰＧＣ－７ａ的表达，在成熟的棕色逡逑脂肪细胞中，用ｔ／ＣＰ－７启动子激活ＷｎｔｌＯｂ，会刺激棕色脂肪细胞向白色脂肪细胞转变逡逑［１５］。研宄表明＾＾也５３、＼＾泣１０１３在脂肪细胞生成过程中不表达；而＼＾付１０１３缺乏会增加逡逑肌纤维的脂质积累，增加肌细胞的脂肪生成潜能；相比之下Ｗｎｔ邋１０ｂ的过度表达抑制了逡逑白色脂肪和棕色脂肪的发育［１６］。逡逑ＧＡＴＡ是锌指蛋白转录因子家族，包括六种成分（ＧＡＴＡ１－６），影响脂肪细胞分化的逡逑主要是该家族的ＧＡＴＡ－２和ＧＡＴＡ－３两种成员。在前体脂肪细胞阶段，ＧＡＴＡ－２和ＧＡＴＡ－３逡逑

Ｆｉｇ．２－１邋Ｌｏｃａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒ邋ｆａｔ邋ａｎｄ邋ｉｎｔｅｒｍｕｓｃｕｌａｒ邋ｆａｔ逡逑２．１肌内脂肪生成逡逑肌内脂肪的早期发育发生在胚胎发育过程中，晚期妊娠有明显的表现，在产后快速逡逑发育，在青春期后期发育减慢逡逑在产前阶段，骨骼肌发育主要包括肌肉纤维细胞、脂肪细胞和成纤维细胞的发育。逡逑这些细胞来自于一个共同的多功能细胞，间充质祖细胞。在胎儿骨骼肌发育过程中，间逡逑充质祖细胞首先分化为肌原性或纤维／脂肪细胞系。肌原性细胞系进一步发展为肌肉纤维，逡逑肌内脂肪，肌间脂肪，棕色脂肪细胞和卫星细胞；纤维／脂肪细胞系细胞则发展为肌肉的逡逑基质血管细胞，包括白色脂肪细胞、成纤维细胞和静止的纤维／脂肪祖细胞ＦＡＰｓ逡逑（ｆｉｂｒｏ／ａｄｉｐｏｇｅｎｉｃ邋ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ）。这些静止的ＦＡＰｓ用于出生后的脂肪形成和成熟肌肉中逡逑的纤维形成在发育后期通过增大脂肪细胞体积和重量来完成脂肪的沉积。逡逑２．２肌内脂肪与肉品质的相关性逡逑ＩＭＦ含量显著影响肉的风味，多汁性，嫩度和肉的总体可接受性［４５，４６】。低含量的ＩＭＦ逡逑

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本文编号：2719957