Etv5在小鼠胚胎干细胞中调控印记基因H19及ERK磷酸化作用的机制研究
发布时间：2020-06-24 23:57
【摘要】：ETS(E-twenty six)转录因子家族在多种生物学过程中扮演重要的角色,包括细胞增殖,分化,迁移,凋亡以及肿瘤的发生。Etv5(ETS variant 5)是ETS转录因子家族中的一员,它在精原干细胞,肿瘤细胞以及睾丸,卵巢等组织中广泛表达,与动物不育,前列腺癌,子宫内膜癌等多种发育过程及疾病发生密切相关。然而,Etv5在小鼠胚胎干细胞(m ESCs)中发挥的作用及机制尚未有明确的报道。本研究旨在确定Etv5在m ESCs中的表达特点,研究Etv5在mESCs中的调控功能,为探究mESCs多能性调控机制提供理论依据。本研究主要获得以下结果:1.Etv5在不同细胞系和组织中的表达谱分析利用Bio-GPS数据库,比较了Etv5在不同细胞系和组织中的表达情况,发现Etv5在多能干细胞和肺组织中高表达;应用Chip-seq数据库分析了Etv5在mESCs和小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中的转录活性,发现Etv5在m ESCs中的转录活性更高;最后,通过RT-qPCR检测,发现Etv5在干细胞中的表达更高。2.Etv5对mESCs多能性的影响本研究建立了Etv5敲低mESCs(Etv5 KD mESCs),通过Ap染色,免疫荧光,RT-qPCR以及Western Blot等方法比较了Etv5敲低组和对照组的多能性差异,发现实验组和对照组在细胞形态,AP染色程度,多能基因表达等方面并没有明显差异。3.Etv5对lncRNA H19的调控作用本研究通过lncRNA高通量测序分析,比较了Etv5敲低组和对照组lncRNA的表达差异。通过散点图和热图分析,共找到16个差异表达的lncRNAs,包括7个上调lncRNAs,9个下调lncRNAs。通过RT-qPCR检测,分析了Etv5敲低组,Etv5回补组以及对照组中Etv5和H19的表达情况,发现Etv5和H19的表达负相关。4.Etv5对FGF/ERK信号通路以及Gata6的调控作用本研究建立了Etv5敲除mESCs(Etv5 KO mESCs),通过RT-qPCR和Western Blot检测,发现Etv5敲除实验组中Fgfr2和Gata6的表达明显下调;同时,ERK磷酸化(pERK)水平明显降低。利用PD抑制剂(PD0325901)处理mESCs,通过时间依赖性和浓度依赖性实验,发现pERK受抑制后,Etv5的表达明显下调。结论:本研究确定了Etv5在mESCs中的特异性高表达,证明了Etv5敲低对多能性维持没有显著的影响。证明了Etv5对H19的负调控作用;研究了Etv5通过FGF/ERK信号通路调控Gata6的表达,介导mESCs的原始内胚层分化。本研究丰富Etv5在mESCs中的调控功能,为研究胚胎早期发育过程中调控机制提供了理论依据。
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S814
【图文】：
图 1-1 Ets 家族结构及成员Fig 1-1 The structure and members of Ets family物学功能/PU.1 是造血细胞特定的转录调节剂，可以促进造血祖细胞分Gangenahalli et al., 2005)。PEA3 亚家族作为成 FGF 信号通路的1 一起参与胚胎发育过程中神经元的特异分化过程(Ladle an生过程中，Ets 蛋白可以通过多种信号通路，激活 ECM 降解相的浸润和迁移(Taki et al., 2006)。tv5 的生物功能5 是维持小鼠精原干细胞自我更新和增殖能力的关键转录因子定和精子发育(Eo et al., 2011; Eo et al., 2012; Tyagi et al., 2009)号通路的下游效应物，可以促进成体干细胞的自我更新以及癌, 2012; Monge et al., 2007)。
图 2-1 lncRNA 的作用机制(Wang and Chang, 2011)Fig 2-1 The mechanism of lncRNA号分子cRNA 能够响应来自细胞内或细胞外的信号，作为特定信号通路的调节剂，lncRNA Kcnq1ot1 和 Air 可以在等位基因的启动子染色质区聚集，以式调控组蛋白的修饰，引起等位基因的沉默(Mohammad et al., 2009)。在控网络中，lncRNA lincRNA-p21 可以结合到 P53 下游基因的调控区，通 K（hnRNP-K）的富集，抑制靶向基因的表达(Huarte et al., 2010)。饵分子些 lncRNA 可能充当分子诱饵的作用，它可以诱导某些蛋白、RNA 或者特定的区域，发挥生物功能，有些诱饵分子还可以成为蛋白或 miRNA 的通过竞争性抑制，发挥调控功能。lncRNA DANCR 竞争性诱捕 miR-372，促进 ROCK-1 介导的骨肉瘤扩散和转移(Wang et al., 2018)。向作用
本文编号：2728550
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S814
【图文】：
图 1-1 Ets 家族结构及成员Fig 1-1 The structure and members of Ets family物学功能/PU.1 是造血细胞特定的转录调节剂，可以促进造血祖细胞分Gangenahalli et al., 2005)。PEA3 亚家族作为成 FGF 信号通路的1 一起参与胚胎发育过程中神经元的特异分化过程(Ladle an生过程中，Ets 蛋白可以通过多种信号通路，激活 ECM 降解相的浸润和迁移(Taki et al., 2006)。tv5 的生物功能5 是维持小鼠精原干细胞自我更新和增殖能力的关键转录因子定和精子发育(Eo et al., 2011; Eo et al., 2012; Tyagi et al., 2009)号通路的下游效应物，可以促进成体干细胞的自我更新以及癌, 2012; Monge et al., 2007)。
图 2-1 lncRNA 的作用机制(Wang and Chang, 2011)Fig 2-1 The mechanism of lncRNA号分子cRNA 能够响应来自细胞内或细胞外的信号，作为特定信号通路的调节剂，lncRNA Kcnq1ot1 和 Air 可以在等位基因的启动子染色质区聚集，以式调控组蛋白的修饰，引起等位基因的沉默(Mohammad et al., 2009)。在控网络中，lncRNA lincRNA-p21 可以结合到 P53 下游基因的调控区，通 K（hnRNP-K）的富集，抑制靶向基因的表达(Huarte et al., 2010)。饵分子些 lncRNA 可能充当分子诱饵的作用，它可以诱导某些蛋白、RNA 或者特定的区域，发挥生物功能，有些诱饵分子还可以成为蛋白或 miRNA 的通过竞争性抑制，发挥调控功能。lncRNA DANCR 竞争性诱捕 miR-372，促进 ROCK-1 介导的骨肉瘤扩散和转移(Wang et al., 2018)。向作用
【参考文献】
相关期刊论文 前2条
1 陈晓敏;张栋栋;骆健俊;陈润生;;长非编码RNA研究进展[J];生物化学与生物物理进展;2014年10期
2 肖晓辉;温海霞;刘国艺;;Ets转录因子家族的研究进展[J];哈尔滨医科大学学报;2008年02期
本文编号：2728550
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/2728550.html
