四川白鹅GnRH、GnIH基因克

发布时间：2020-06-25 06:39

【摘要】：产蛋性状是鹅重要的经济性状,而鹅产蛋性能低下严重制约鹅产业的发展。禽类的生殖功能是由下丘脑-垂体-性腺轴系统的各类激素之间复杂的相互调控作用所决定。GnRH与GnIH已被证明是下丘脑-垂体-性腺轴(hypothalamus-pituitary-gonadal axis,HPG)的关键信号分子。下丘脑释放的促性腺激素释放激素与抑制激素作用于垂体,调节垂体促性腺激素的分泌,促性腺激素通过外周血液循环影响性腺的内分泌和外分泌,从而控制动物的个体发育以及生殖过程。有研究表明,GnRH与GnIH基因可作为影响猪、牛、羊等动物繁殖性能的候选基因。目前,有关鹅GnRH与GnIH基因的研究很少见报道。本研究选用四川白鹅为试验动物,开展了鹅GnRH和GnIH基因组序列克隆、基因结构分析与SNP检测;采用PCR-RFLP、PCR-SSCP的方法检测鹅GnRH、GnIH的基因型并分析其与产蛋量的关联性。获得的主要研究结果如下:四川白鹅GnRH基因DNA序列长3520bp,包括4个外显子和3个内含子;mRNA序列比对发现鹅与雁GnRH基因的相似性最高,达到92%;共检测到鹅GnRH基因28个SNPs位点,包括外显子上的1个SNP位点(g.3447AC)和内含子上的27个SNPs位点;对内含子1的突变位点(g.490AG)采用BclⅠ限制性内切酶进行酶切分型,共产生3种基因型,分别定义为AA、AB、BB,三种基因型鹅的产蛋量无显著差异(P0.05);对外显子的突变位点(g.3447TG)用PCR-SSCP进行分析,得到三种基因型(TT、TG、GG),三种基因型鹅的产蛋量差异不显著(P0.05)。四川白鹅GnIH基因DNA序列长7621bp,包括4个外显子和3个内含子;mRNA序列比对发现鹅GnIH基因与灰雁、原鸡、鹌鹑的相似性分别高达99%、91%、90%。检测到鹅GnIH基因内含子上有18个SNPs,外显子上有15个SNPs,其中外显子230bp处的碱基GAA缺失、2164bp处的CG突变、2228bp处的TA突变均导致氨基酸发生改变,分别为p.38Glu In Del、p.100ProArg、p.123TryAsn。采用PCR-SSCP方法对外显子1的230bp处碱基GAA缺失与内含子2的3262bp处碱基TTTTG缺失进行基因型分析,均产生两种基因型,分别定义为AA、Aa型与HH、Hh型;AA、Aa基因型及HH、Hh基因型鹅产蛋量差异均不显著(P0.05)。采用SmaⅠ与EcoR V酶切的方法分别对内含子1(g.1320GA)与外显子3(g.3553TC)的突变位点进行基因型分析,结果显示:1320bp处酶切产生的CC基因型鹅产蛋量显著高于CD与DD基因型(P0.05);3553bp酶切产生的EE、EF、FF三种基因型鹅产蛋量差异不显著(P0.05)。本研究首次获得了四川白鹅GnRH、GnIH基因DNA序列与SNP位点;GnIH基因g.1320GA突变所产生的CC基因型产蛋量显著高于其他两种基因型产蛋量。该研究结果为鹅GnRH、GnIH基因功能的进一步研究奠定基础,为鹅产蛋调控机制的研究提供了参考。
【学位授予单位】：西南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S835
【图文】：

基因结构,激素,分泌素,卵泡刺激素

综述RH 基因研究进展腺激素释放激素（gonadotropin-releasing hormone，Gn释放激素（luteinizing hormone-releasing hormone，LHly[1]和 Guillenmin[2]于 1971 年，从 16 万头猪的下丘脑nRH并首次分离提纯获得的一类由单拷贝基因GnRH表种不同氨基酸残基组成的直链十肽促激素，其氨基酸u-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2。GnRH 最重为生殖系统的一种关键性神经调节物质，刺激垂体分泌素（luteinizing hormone, LH）和卵泡刺激素（follicle-se, FSH）。随着分子生物学的迅速发展，GnRH 已被证明是腺轴（hypothalamus-pituitary-gonadal axis, HPG）的关键信过程的重要激素。

前体蛋白

图 2 GnIH 前体蛋白结构Fig.2 Precursor protein structure of GnIH将鹌鹑脑中的 GnIH 分离出来，此后在鸟类一种能编码mRNA 也被克隆出来[58]。Tobari Y[59]利用 5’和 3’Race 获2bp的全基因序列，其基因结构为2个内含子和3个外显脑组织并成功获得了 GnIH 前体肽的 cDNA。Ikemoto 隆技术获得 971bp 鸡 GnIH 基因的 cDNA 序列，该序列组成的 5’-调控区、519 个核苷酸组成的开放阅读框和 3’-调控区。其中开放阅读框可以编码含有 173 个氨基酸基因结构与斑胸草雀基因结构一致也由 2 个内含子和 3 后克隆获得鸭子 GnIH 前体 1389bp 的完整序列，开放氨基酸。董霞[61]通过测序获得了鹅 GnIH 基因 CDS 区1bp 长度的序列，与禽类的 GnIH 相似性达到 87%以k 登录号：KC_514473。李洵[62]将猪的 24 个组织混合样GnIH基因442bp编码146个氨基酸残基的基因序列。Ts

【参考文献】