白藜芦醇干混悬剂的制备及其对免疫功能的影响

发布时间：2020-06-27 10:18

【摘要】：白藜芦醇具有丰富的生理功能和较强的生物学活性。然而其水溶性差,且在溶液中的稳定性受到各种因素的影响,这些原因限制了白藜芦醇作为药品的开发和应用。本研究以改善白藜芦醇难以分散混悬于水中的特点,保证其溶液中的稳定性为目标,研制白藜芦醇干混悬剂(RDS),在此基础上,以小鼠和猪作为研究对象,评价其对免疫功能的影响,为白藜芦醇新兽药的研制奠定基础,主要研究内容及结果如下:1白藜芦醇干混悬剂的制备和评价采用单因素法和正交试验筛选出合适的辅料用于制备白藜芦醇干混悬剂,从性状,鉴别,检查,含量和稳定性等方面对RDS进行了质量评价;采用高效液相色谱法分析含量并研究了RDS在7天内的含量变化,再分散性,沉降体积比等指标。结果表明RDS符合干混悬剂的质量标准,7天内再分散性较好,沉降体积比和含量变化均符合要求,在高温高湿和光照影响下稳定性良好。2白藜芦醇干混悬剂对小鼠免疫功能的影响采用腹腔注射环磷酰胺法建立小鼠免疫功能低下的模型。共设立7个组:空白组,即健康小鼠组,不给药;模型组,即免疫低下小鼠,不给药;阳性药物组,即免疫低下小鼠,分别灌胃黄芪多糖粉50mg/kg b.w.和紫锥菊末250mg/kg b.w.;高中低剂量组,即免疫低下小鼠分别灌胃RDS 0.88g/kg b.w、1.67g/kg b.w、3.33g/kg b.w。一周后检测小鼠脏器系数、T淋巴细胞亚群的变化、脾淋巴细胞增殖活性及细胞因子水平等。结果表明,环磷酰胺造模显著降低了小鼠的各项免疫指标,而RDS给药能显著提高免疫抑制小鼠的脾脏指数,恢复环磷酰胺造成的辅助/诱导T淋巴细胞(CD3+CD4+)比抑制/细胞毒T淋巴细胞(CD3+CD8+)比值的下降,显著提高小鼠脾淋巴细胞的增殖活性,提高细胞因子白介素-2(IL-2)的释放。证明RDS对于免疫低下的小鼠有良好的增强免疫的作用。分别采用醋酸致小鼠腹腔通透性增加模型,二甲苯致小鼠耳肿胀模型,腹股沟植入棉球致小鼠肉芽肿模型评价RDS对于不同炎症反应的作用。结果表明,RDS能显著抑制小鼠的腹腔通透性增加程度和耳肿胀程度,并降低棉球所致的肉芽肿重量。RDS对于急性炎症和慢性炎症均表现出了良好的抗炎活性。3白藜芦醇干混悬剂对仔猪免疫功能的影响采用28日龄的健康仔猪,灌胃不同剂量的RDS 14天,检测仔猪的生长性能,注射疫苗后产生的抗体水平,血清中免疫球蛋白含量和细胞因子水平,淋巴细胞的增殖活性,血常规和生化指标的变化情况等,评价制剂对于仔猪免疫功能的影响。结果表明,RDS(0.1-0.33g/kg b.w.)显著提高了外周血淋巴细胞和脾淋巴细胞的增殖活性,提高了仔猪在猪瘟疫苗(CSFV)和猪口蹄疫疫苗(FMDV)刺激下产生的抗体水平,显著提高了仔猪血清中免疫球蛋白IgG和IgM的含量(p0.05)。RDS还能增强血清的总抗氧化能力;促进干扰素-γ(IFN-γ)的释放,抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的释放。RDS对仔猪的血常规和生化指标无明显影响。表明了RDS对增强仔猪免疫功能具有良好的效果。综上所述,白藜芦醇干混悬剂能够改善白藜芦醇难以分散混悬于水中的特点,具有良好的稳定性;对于免疫抑制小鼠具有显著的增强免疫功能的效果,对于急性炎症和慢性炎症都有良好的抑制作用;能显著增强仔猪的免疫功能,提高免疫疫苗后血清中的抗体水平,有望进一步开发应用于兽医临床。
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S853.73
【图文】：

HPLC图谱,标准品,白藜芦醇,峰面积

图 2-1 白藜芦醇的浓度-峰面积的线性关系g.2-1 The linear relationship of concentration - peak area of re的测定结果供试品溶液，甲醇稀释，过滤，进样 10μl, 注入高效液测定峰面积。按照回归曲线方程计算含量。为三批样品的白藜芦醇含量分别为 32.2mg/g，32.3mg中的含量要求。R2 = 0.999201000000020000000300000004000000050000000600000000 20 40 60 80 100 120

HPLC图谱,样品,高效液,回归曲线方程

的测定结果供试品溶液，甲醇稀释，过滤，进样 10μl, 注入高效液测定峰面积。按照回归曲线方程计算含量。为三批样品的白藜芦醇含量分别为 32.2mg/g，32.3mg中的含量要求。图 2-2 标准品的 HPLC 图谱Fig.2-2 HPLC Atlas of standard products

【参考文献】