鸡源大肠杆菌多位点序列分型分析

发布时间：2020-06-29 08:06

【摘要】：鸡大肠杆菌病是由禽致病性大肠杆菌引起。临床表现为败血症、气囊炎、腹膜炎、肝周炎、心包炎、眼球炎、关节炎等,发病率为11%-69%,死亡率为3.8%-72.9%,对养禽业带来了巨大的损失。大肠杆菌致病菌株多,其疾病病变复杂。因此,该病及时诊断和菌株的准确分型,对鸡大肠杆菌病的控制具有重要意义。从病鸡内脏器官和鸡舍空气分离菌株,观察菌落、菌体形态,提取分离株DNA,进行16S rDNA扩增,经测序比对对分离株鉴定。同时,观察病鸡剖检病变,并采集病料制作常规石蜡切片,进行组织病理学观察。结果显示分离株在营养琼脂上菌落呈圆形凸起、光滑、湿润、半透明、灰白色;伊红美蓝琼脂板上菌落呈金属色光泽,圆形棕色菌落;革兰染色阴性两极着色的短杆菌。与GeneBank大肠杆菌同源性为98.2%-99.3%。经序列分析结合菌体菌落形态,共鉴定65株大肠杆菌,其中42株来源临床,23株来源环境。病鸡剖检发现肝脏肿大、有纤维素性渗出、气囊浑浊、腹腔内有卵黄样物质;组织观察发现肝外膜增厚,表面覆盖纤维性伪膜,在血管周围及汇管区,炎性细胞增多;心肌外膜增厚,表面有大量纤维性渗出,炎性细胞浸润,心肌纤维排列紊乱,个别心肌纤维断裂。病理变化结合大肠杆菌的分离鉴定,对鸡大肠杆菌病进行诊断。对65株大肠杆菌进行多位点序列分型,同时对毒力基因、血清型、药敏进行分析,并探讨基因型与致病基因、血清型、耐药间的关系。结果显示65株大肠杆菌分为32个序列型(sequence types,ST)。其中已知ST为13个,新ST为19个。32个ST型在数据库中属于9个同源复合体和2个独特型。通过UPGMA分为5个群,14个单独型。鸡舍空气分离株以ST-21为主,肛拭子分离株以nST-8为主,成年病鸡分离株以ST-88为主,病雏鸡分离株以nST-11为主,不同来源的ST型除个别菌株有交叉外,其余均不相同,说明不同来源的分离株其主要的ST型不同,大肠杆菌ST型的种类、优势型与其寄生的环境和宿主日龄不同有关。22株大肠杆菌血清型共有9种、ST型有14种。其中鸡舍空气分离株有3种血清型7种ST型;成年病鸡分离株有6种血清型8个ST型。成年病鸡分离株血清型包含鸡舍空气分离株血清型,但基因型只有个别有交叉。从结果上可以看出ST型分辨力更高,更精细。23株大肠杆菌(14种ST型)对6类12种抗生素进行耐药分析。其中林可胺类(Lincosamides,LINs)耐药率最高,达100%,β-内酰胺类(Beta-Lactams antibiotics,BLs)为95.65%,四环素类(Tetracycline,TCs)为91.30%,对氨基糖苷类(Aminoglycoside antibitics,AGs)和大环内酯类(Macrolides antibiotics,MALs)为86.96%,喹诺酮类(Quinolione,QLs)最低,为82.61%。形成18种耐药谱。65株大肠杆菌的glgP、menA、fimC、fimH检出率为100%,evgA检出率为95.40%,traB检出率为33.80%。65株分离株形成有3个毒力谱,以glgP-menA-evgA-fimC-fimH毒力谱为主。
【学位授予单位】：河北工程大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S852.61
【图文】：

大体解剖,鸡肝脏,物质,心包

12图 2-1 鸡的大体解剖图A、B 肝脏、心包表面有纤维素性物质；C、D 腹腔内有卵黄样物质；E、气囊壁增厚有干酪样物质；F、对照鸡肝脏；箭头是指示说明。Fig. 2-1 Gross anatomy of chickenThe liver of A and B, the surface of the pericardium has a cellulose substance; C, D is a yolk-likesubstance in the abdominal cavity; E, the wall of the air bag is thickened with a cheese-likesubstance; and F, the liver of the control chicken; The arrow is an indication.

肝外,炎性细胞,肝细胞,空泡

图 2-2 肝脏病理学观察A、肝外膜增厚；B、炎性细胞增多、窦间隙增大；C、肝出血、空泡增多；D、E、F 肝细胞内炎性细胞浸润；G、H 对照组肝脏组织切片；箭头是指示说明。Fig. 2-2 Liver pathology observationA, The thickening of the adventitia of the liver; B, the increase of inflammatory cells and theincrease of the interstitial space; C, the bleeding of the liver, the increase of vacuoles; Theinfiltration of inflammatory cells in D, E and F hepatocytes; G, H control group liver tissue sectionThe arrow is an indication.A B

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