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p38MAPK通路关键基因在鹅等级前卵泡中的表达规律研究

发布时间:2020-07-08 20:06
【摘要】:鹅养殖业是近年兴起的朝阳产业,而鹅季节性产蛋特点是制约养鹅业发展的一个重要因素。对鹅卵泡发育机制的探究有助于我国鹅养殖业的持续进步。现有研究表明p38MAPK信号通路对家禽的卵泡发育存在一定的调控作用,本研究选择处于产蛋高峰期的籽鹅,采集其等级前卵泡,使用免疫组织化学(IHC)技术确定通路上关键基因在等级前卵泡中的表达位点;使用实时荧光定量PCR(qPCR)检测目的基因在mRNA水平的表达情况;使用蛋白免疫印迹(Western Blot)技术检测目的基因在蛋白质水平的表达情况,并利用显著性检验和相关性分析初步分析目的基因的生物学功能。研究试验结果如下:(1)通过qPCR技术对p38MAPK信号通路上关键基因在籽鹅等级前卵泡中的表达量进行mRNA水平的探究,并进行显著性检验。结果发现研究中所有目的基因在5种等级前卵泡中均表达,且表达量的最大值和最小值存在显著性差异(p0.05)。其中,目的基因TGF-βI、TGF-βRII、Fas、Fasl的表达规律呈现先增加后减少的趋势,在MWF中的表达量最高;目的基因DAXX、ASK1、MKK3、MKK6、p38α的表达规律呈现先减少再增加而后趋于稳定的趋势,在MWF中的表达量最低,其中ASK1在SYF中的表达量最高,而其余基因在pe卵泡中的表达量最高。(2)对qPCR试验结果进行相关性分析,结果发现,p38MAPK信号通路上基因的相关性存在时空差异性。在pe卵泡、SWF、MWF中,TGF-β及其受体对信号通路其主要调控作用,且抑制信号通路中支持卵泡发育的相关基因的表达;而在LWF和SYF中,Fas、Fasl对信号通路的调节作用增强,卵泡发育得到支持促进。(3)通过IHC试验对目的蛋白ASK1和p38α在籽鹅等级前卵泡的表达进行定位分析,结果发现两种目的蛋白在籽鹅5种等级前卵泡中的膜层细胞(TC)和颗粒层细胞(GC)中均检测出阳性表达位点,且存在一定的时空差异性。(4)通过Western Blot技术对目的基因ASK1、MKK3、p38α在籽鹅等级前卵泡中的表达量进行蛋白质水平的研究。结果发现三种目的蛋白在等级前卵泡中表达量的整体趋势与qPCR试验结果一致,但存在一定差异,而相关性分析结果也与qPCR结果存在一定差异。(5)结合卵泡发育规律及p38MAPK信号通路上基因的表达规律可以发现,p38MAPK信号通路对籽鹅等级前卵泡存在一定的促进支持作用,其中TGF-βI、TGF-βRII、Fas、Fasl对卵泡发育起抑制作用,DAXX、ASK1、MKK3、MKK6、p38α对卵泡发育起促进作用。
【学位授予单位】:吉林农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:S835
【图文】:

前卵,等级,卵泡


图 1.1 鹅等级前卵泡Fig.1.1 pre-hierarchical follicles of Geese象使得大部分卵泡没有完成发育即发生退化,这一个重要原因[4, 6]。卵泡的闭锁是一个有机体调控的LH 等生殖激素的调控[27],又受到一些细胞因子及是一个不可逆过程,发生闭锁的卵泡在形态上与闭锁卵泡表面会出现凹陷,同时有红斑,卵泡膜细生破裂,卵泡液发生溢出[11, 31]。卵泡在各个发育阶尚不成熟,体积较小的卵泡中,卵泡的闭锁由卵母,体积较大的卵泡中,闭锁过程由颗粒细胞调控[1对于卵泡是否发生闭锁有着重要作用,有研究表明增殖或凋亡会影响卵泡的生长发育进程,而且会打

信号通路


图 1.2 MAPK 信号通路图Fig.1.2 MAPK signaling pathway注:图中绿色边框中所含基因即为本试验所研究的目的基因。MAPK 的级联调控严格遵循上下游模式。即:上游的细胞因子与特异性受体(或配体)结合,产生信号,传递到下游蛋白(DAXX),接着传递到下游的MAPKKK(ASK1),随后是 MAPKK(MKK3/6)最后到达 MAPK(p38)。而激活的 p38MAPK 进一步磷酸化,会激活后续的激酶,从而调节机体的各项生理过程。从以上激活过程可以看出,MAPK 的激活前体物质 MAPKK 和 MAPKKK 的种类较为单一,而 MAPKKK 的前体物质则有很多[45, 46]。同时,不同种类的 MAPK信号通路之间也存在着协同或拮抗作用的关系[47]。p38MAPK 在 1993 年由 Brewster 研究发现。Brewster 等[38, 48]对巨噬细胞使用脂多糖(LPS)进行刺激,首先发现了这种激酶。随后,Han[16]等对这种试验的产物进行分离纯化,得到一种蛋白质。分子量约为 38KDa,包含 360 多个氨基酸,由此,这种蛋白被命名为 p38MAPK。p38MAPK 是 MAPK 家族的重要成员,参与多种生物学反应,如炎症反应、细胞增殖与凋亡、组织分化、肿瘤发生、

电泳图,电泳图,前卵,等级


rimer 0.6rimer 0.6 2 dH2O 6.4X 0.4ume 20的基因在 5 个等级前卵泡的相对表达量使SPSS 19.0 进行数据的统计分析。泳对试验用籽鹅 5 种等级前卵泡的总 R8s,28s 处条带清晰,无杂带,证明其质示。

【参考文献】

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1 刘兆芳;范洪江;逄明杰;;p38 MAPK与变应性鼻炎的研究进展[J];临床耳鼻咽喉头颈外科杂志;2015年23期

2 胡世福;夏伟;朱长虹;;P38αMAPK在雌性生殖系统中的研究进展[J];国际生殖健康/计划生育杂志;2015年01期

3 张昊;陈芳;梁振华;杜金平;;家禽卵泡闭锁研究进展[J];湖北畜牧兽医;2014年10期

4 马兰芳;杨书红;罗爱月;熊家强;王世宣;;磷酸化p38 MAPK在小鼠卵泡发育中的表达[J];中国妇幼保健;2014年23期

5 赵煜;周宏超;杨鸣琦;刘晓强;李引乾;;玉米赤霉烯酮对雌性大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白Fas及FasL表达的影响[J];中国兽医学报;2014年06期

6 李楠;刘艳霞;金哲;;中药育泡饮对大鼠卵巢颗粒细胞P38MAPK表达的影响[J];中华中医药学刊;2014年05期

7 丁凤玲;魏华;陈阿琴;沙晓姣;任周;余言想;;p38MAPK在斑马鱼卵母细胞减数分裂恢复中的作用[J];淡水渔业;2014年01期

8 黄品秀;李蓉;韦继红;;卵泡的发育和调控机制研究进展[J];国际生殖健康/计划生育杂志;2014年01期

9 李玲;李云波;李柳叶;朱秀娟;;乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞P38MAPK信号转导途径的影响[J];山西中医学院学报;2013年06期

10 赵献芝;李静;王启贵;;鹅繁殖性能研究进展[J];上海畜牧兽医通讯;2013年06期

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5 金艳梅;鸡等级前卵泡颗粒细胞发育的激素和营养调控及机理研究[D];浙江大学;2007年

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本文编号:2746982

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