p38MAPK通路关键基因在鹅等级前卵泡中的表达规律研究

发布时间：2020-07-08 20:06

【摘要】：鹅养殖业是近年兴起的朝阳产业,而鹅季节性产蛋特点是制约养鹅业发展的一个重要因素。对鹅卵泡发育机制的探究有助于我国鹅养殖业的持续进步。现有研究表明p38MAPK信号通路对家禽的卵泡发育存在一定的调控作用,本研究选择处于产蛋高峰期的籽鹅,采集其等级前卵泡,使用免疫组织化学(IHC)技术确定通路上关键基因在等级前卵泡中的表达位点;使用实时荧光定量PCR(qPCR)检测目的基因在mRNA水平的表达情况;使用蛋白免疫印迹(Western Blot)技术检测目的基因在蛋白质水平的表达情况,并利用显著性检验和相关性分析初步分析目的基因的生物学功能。研究试验结果如下:(1)通过qPCR技术对p38MAPK信号通路上关键基因在籽鹅等级前卵泡中的表达量进行mRNA水平的探究,并进行显著性检验。结果发现研究中所有目的基因在5种等级前卵泡中均表达,且表达量的最大值和最小值存在显著性差异(p0.05)。其中,目的基因TGF-βI、TGF-βRII、Fas、Fasl的表达规律呈现先增加后减少的趋势,在MWF中的表达量最高;目的基因DAXX、ASK1、MKK3、MKK6、p38α的表达规律呈现先减少再增加而后趋于稳定的趋势,在MWF中的表达量最低,其中ASK1在SYF中的表达量最高,而其余基因在pe卵泡中的表达量最高。(2)对qPCR试验结果进行相关性分析,结果发现,p38MAPK信号通路上基因的相关性存在时空差异性。在pe卵泡、SWF、MWF中,TGF-β及其受体对信号通路其主要调控作用,且抑制信号通路中支持卵泡发育的相关基因的表达;而在LWF和SYF中,Fas、Fasl对信号通路的调节作用增强,卵泡发育得到支持促进。(3)通过IHC试验对目的蛋白ASK1和p38α在籽鹅等级前卵泡的表达进行定位分析,结果发现两种目的蛋白在籽鹅5种等级前卵泡中的膜层细胞(TC)和颗粒层细胞(GC)中均检测出阳性表达位点,且存在一定的时空差异性。(4)通过Western Blot技术对目的基因ASK1、MKK3、p38α在籽鹅等级前卵泡中的表达量进行蛋白质水平的研究。结果发现三种目的蛋白在等级前卵泡中表达量的整体趋势与qPCR试验结果一致,但存在一定差异,而相关性分析结果也与qPCR结果存在一定差异。(5)结合卵泡发育规律及p38MAPK信号通路上基因的表达规律可以发现,p38MAPK信号通路对籽鹅等级前卵泡存在一定的促进支持作用,其中TGF-βI、TGF-βRII、Fas、Fasl对卵泡发育起抑制作用,DAXX、ASK1、MKK3、MKK6、p38α对卵泡发育起促进作用。
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S835
【图文】：

图 1.1 鹅等级前卵泡Fig.1.1 pre-hierarchical follicles of Geese象使得大部分卵泡没有完成发育即发生退化，这一个重要原因[4, 6]。卵泡的闭锁是一个有机体调控的LH 等生殖激素的调控[27]，又受到一些细胞因子及是一个不可逆过程，发生闭锁的卵泡在形态上与闭锁卵泡表面会出现凹陷，同时有红斑，卵泡膜细生破裂，卵泡液发生溢出[11, 31]。卵泡在各个发育阶尚不成熟，体积较小的卵泡中，卵泡的闭锁由卵母，体积较大的卵泡中，闭锁过程由颗粒细胞调控[1对于卵泡是否发生闭锁有着重要作用，有研究表明增殖或凋亡会影响卵泡的生长发育进程，而且会打

图 1.2 MAPK 信号通路图Fig.1.2 MAPK signaling pathway注：图中绿色边框中所含基因即为本试验所研究的目的基因。MAPK 的级联调控严格遵循上下游模式。即：上游的细胞因子与特异性受体（或配体）结合，产生信号，传递到下游蛋白（DAXX），接着传递到下游的MAPKKK（ASK1），随后是 MAPKK（MKK3/6）最后到达 MAPK（p38）。而激活的 p38MAPK 进一步磷酸化，会激活后续的激酶，从而调节机体的各项生理过程。从以上激活过程可以看出，MAPK 的激活前体物质 MAPKK 和 MAPKKK 的种类较为单一，而 MAPKKK 的前体物质则有很多[45, 46]。同时，不同种类的 MAPK信号通路之间也存在着协同或拮抗作用的关系[47]。p38MAPK 在 1993 年由 Brewster 研究发现。Brewster 等[38, 48]对巨噬细胞使用脂多糖（LPS）进行刺激，首先发现了这种激酶。随后，Han[16]等对这种试验的产物进行分离纯化，得到一种蛋白质。分子量约为 38KDa，包含 360 多个氨基酸，由此，这种蛋白被命名为 p38MAPK。p38MAPK 是 MAPK 家族的重要成员，参与多种生物学反应，如炎症反应、细胞增殖与凋亡、组织分化、肿瘤发生、

rimer 0.6rimer 0.6 2 dH2O 6.4X 0.4ume 20的基因在 5 个等级前卵泡的相对表达量使SPSS 19.0 进行数据的统计分析。泳对试验用籽鹅 5 种等级前卵泡的总 R8s，28s 处条带清晰，无杂带，证明其质示。

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 刘兆芳;范洪江;逄明杰;;p38 MAPK与变应性鼻炎的研究进展[J];临床耳鼻咽喉头颈外科杂志;2015年23期

2 胡世福;夏伟;朱长虹;;P38αMAPK在雌性生殖系统中的研究进展[J];国际生殖健康/计划生育杂志;2015年01期

3 张昊;陈芳;梁振华;杜金平;;家禽卵泡闭锁研究进展[J];湖北畜牧兽医;2014年10期

4 马兰芳;杨书红;罗爱月;熊家强;王世宣;;磷酸化p38 MAPK在小鼠卵泡发育中的表达[J];中国妇幼保健;2014年23期

5 赵煜;周宏超;杨鸣琦;刘晓强;李引乾;;玉米赤霉烯酮对雌性大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白Fas及FasL表达的影响[J];中国兽医学报;2014年06期

6 李楠;刘艳霞;金哲;;中药育泡饮对大鼠卵巢颗粒细胞P38MAPK表达的影响[J];中华中医药学刊;2014年05期

7 丁凤玲;魏华;陈阿琴;沙晓姣;任周;余言想;;p38MAPK在斑马鱼卵母细胞减数分裂恢复中的作用[J];淡水渔业;2014年01期

8 黄品秀;李蓉;韦继红;;卵泡的发育和调控机制研究进展[J];国际生殖健康/计划生育杂志;2014年01期

9 李玲;李云波;李柳叶;朱秀娟;;乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞P38MAPK信号转导途径的影响[J];山西中医学院学报;2013年06期

10 赵献芝;李静;王启贵;;鹅繁殖性能研究进展[J];上海畜牧兽医通讯;2013年06期

相关博士学位论文 前5条

1 张志超;时钟基因在母鸡生殖系统中的节律性表达及颗粒细胞中时控基因的筛选[D];四川农业大学;2016年

2 计红;α-烯醇化酶对籽鹅卵泡颗粒细胞功能的影响及相关机制研究[D];吉林大学;2015年

3 甄艳红;MAPK-CEBPβ对猪颗粒细胞凋亡、周期及类固醇激素分泌的调控作用和机制的研究[D];华中农业大学;2014年

4 刘韵鹏;Claudin-6通过P38 MAPK信号通路抑制肺腺癌细胞H1299恶性表型的作用[D];吉林大学;2013年

5 金艳梅;鸡等级前卵泡颗粒细胞发育的激素和营养调控及机理研究[D];浙江大学;2007年

相关硕士学位论文 前10条

1 孙沛颖;Daxx在小鼠胚胎早期妊娠中的表达[D];牡丹江师范学院;2016年

2 熊昊;Ala-Gln通过mTOR/p38MAPK信号通路介导仔猪小肠上皮细胞自噬的研究[D];江西农业大学;2016年

3 娄亚萍;鹅卵泡闭锁过程中氧化应激诱导颗粒细胞自噬的研究[D];浙江农林大学;2015年

4 郑娜娜;硫化氢在p38MAPK通路中对肝细胞增殖/凋亡的影响[D];石河子大学;2015年

5 魏曼莉;鸡VDAC1、VDAC2和MOSPD1基因在前等级卵泡中的时空表达及VDAC基因与产蛋性状的关联[D];吉林农业大学;2015年

6 李亮;LH信号通路抑制剂对鸡F1卵泡中颗粒细胞时钟基因表达的影响[D];四川农业大学;2014年

7 曹芳元;对乙酰氨基酚联合乙酰半胱氨酸对免疫应激仔猪MAPK和NF-κB信号通路的影响[D];武汉轻工大学;2013年

8 陈永兰;p38MAPK信号通路对小胶质细胞功能及NGF、TNFα分泌的影响[D];大连医科大学;2012年

9 张旭;籽鹅血清中FSH、LH和PRL与卵巢相应受体mRNA表达的关系[D];黑龙江八一农垦大学;2010年

10 方弟安;皖西白鹅就巢的内分泌机制及其调控的研究[D];安徽农业大学;2005年

本文编号：2746982