谷氨酸对小鼠MZT期胚胎发育阻滞及相关基因表达影响的研究
发布时间：2020-07-09 13:59
【摘要】：哺乳动物胚胎体外培养体系处于次优化水平,胚胎常面临发育迟缓的风险。活性氧(Reactive oxygen species,ROS)物质生产与清除能力的失衡,将导致小鼠胚胎2-细胞期发育阻滞等问题。本论文想要从发育阻滞的分子层面进行研究,旨在探究谷氨酸在小鼠MZT期胚胎体外培养过程中能否起到克服发育阻滞的作用,以期为从根本上解决因发育阻滞导致的低生产率等问题提供一定理论基础。本试验设计了两个不同的试验组(谷氨酸处理组,M16对照组),通过对发育阻滞品系昆明小鼠2-细胞早期、2-细胞中期及2-细胞晚期时期的胚胎进行对比,利用DCFH-DA测定小鼠胚胎内部活性氧含量,利用CMF2HC测定小鼠胚胎内部GSH含量,最后对GPx基因即GPx1,4和ZGA标记基因即Eif-1α,Muervl,Zscan4d和Hsp70.1的mRNA表达水平进行分析检测。试验结果表明:1、6mmol/L谷氨酸处理组小鼠MZT期胚胎的2-细胞向4-细胞过渡率,显著高于M16对照组和其余各浓度谷氨酸处理组;2、谷氨酸处理组小鼠MZT各时期胚胎内ROS和GSH含量均无显著差异,其中ROS水平显著低于M16对照组,GSH水平均显著高于M16对照组;3、谷氨酸处理组诱导小鼠MZT期胚胎内各GPx基因表达上调;4、谷氨酸处理组诱导小鼠MZT期胚胎内ZGA标记基因表达上调,尤其在MZT中期和晚期显著升高;综上所述,浓度为6mmol/L谷氨酸可通过刺激GPx1和GPx4酶活性维持GSH与ROS含量动态平衡,间接参与清除ROS的抗氧化过程;通过提高ZGA标记基因表达水平及维持其时序性高表达模式,直接参与ZGA启动过程;最终有效降低发育阻滞风险,确保MZT顺利完成。
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S814
【图文】：
子的氧化还原反应产生特征荧光信号，检测昆明系小鼠胚胎ＭＺＴ期活性氧水平。逡逑随机收集各处理组ＭＺＴ期胚胎，避光染色，荧光显微镜观察，并进行拍照，利逡逑用Ｉｍａｇｅ软件对获得的荧光图片进行分析，获得荧光量化分析图，见图３－３。逡逑逦逦邋２「逦－Ｍ１６逡逑ＨＢ邋ｍ邋Ｉ邋［ｉ逡逑…邋３堓Ｖ；？．邋ｉ－＇逦２ｉｅｌｌ早朗邋２ｉｅｌｌ中期邋２ｉｅ＂灥逡逑２邋ｒ逦ｃ逦ｍ邋２－ｃｅｌ＾ＭＢ逡逑．逦｜逦＿逦Ｓ邋２＞ｃｅＪＩ中期逡逑ｓ邋Ｐ邋１－５逦＂逦ｂ邋ｍ逦甬邋２￣ｃｅｉ＿逡逑ＥＨ丨咖逡逑Ｍ１６逦Ｇｌｕ逡逑图３－３小鼠ＭＺＴ期胚胎ＤＣＨＦＤＡ染色图及量化结果（４００Ｘ邋）逡逑Ｍｇ邋３－３邋Ｍｏｕｓｅ邋ＭＺＴ邋ｅｍｂｉ７0ｓ邋ＤＣＨＦＤＡ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ邋ｆｉｇｕｒｅ邋ａｎｄ邋ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ邋ｒｅｓｕｌｔｓ邋（４００ｖ）逡逑注：Ａ．对照组；Ｂ．谷氨酸处理组逡逑Ｎｏｔｅ：Ａ．Ｃｏｎｔｒｏｌ；Ｂ．ＧＩｕ邋ｔｒｅａｔ逡逑从图３－３的荧光染色图可看出：谷氨酸处理组的荧光强度Ｖ著低Ｔ对照组（Ｐ逡逑＜０．邋０５）。从阁３－３的量化分析图可看出各试验组胚胎内活性较水平，即２－Ｃｅｌｌ逡逑２３逡逑
图３－４对照组和谷氨酸处理组的ＧＳＨ，ＲＯＳ相对水平逡逑Ｆｉｇ邋３－４邋Ｒｅｌａｔｉｖｅ邋ｌｅｖｅｌ邋ｏｆ邋ＧＳＨ，邋ＲＯＳ邋ｉｎ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋ａｎｄ邋Ｇｌｕ邋ｔｒｅａｔ逡逑如图３－４所示，是ＧＳＨ和ＲＯＳ分别在对照组和谷氨酸处理组水平（含景）逡逑的量化情况，从量化分析图不难看出，谷氨酸处理组：昆明小鼠ＭＺＴ＾ｆ同时期逡逑胚胎内ＧＳＨ水平均高于ＲＯＳ水平，无明显波动；々之相反，对照组：昆明小鼠逡逑ＭＺＴ晚期胚胎内ＧＳＨ水平低ＲＯＳ水平，且随将ＲＯＳ不断累积逐渐下降。本逡逑试验结果证实了谷氨酸能够使ＭＺＴ期胚胎内ＧＳＨ和ＲＯＳ水平含量保持相对稳逡逑定，为接下来的试验中研究谷胱甘肽氧化还原系统相关基因的ｍＲＮＡ表达规律逡逑提供…定理论基础。逡逑３．邋３小鼠ＭＺＴ期胚胎内谷胱甘肽氧化还原系统基因的表达分析逡逑本试验选取各试验组不同时期即２－细胞旱期、２－细胞屮期和２－细胞晚期丨Ｋ逡逑胎
图３－５邋ＧＰｘｌ基因ＰＣＲ量化结果逡逑Ｆｉｇ邋３－５邋ＰＣＲ邋ｐｒｏｄｕｃｔｓ邋ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ邋ｒｅｓｕｌｔ邋ｏｆ邋ＧＰｘｌ逡逑从量化分析图３－５可以看出，处于同－？时期胚胎内ＧＰｘｌ基因的ｍＲＮＡ表逡逑达水平，２－ｃｅｌｌ早期：Ｇｌｕ处理组略高于对照组，无显著性差异（Ｐ＞０．邋０５）邋；邋２－ｃｅｌｌ逡逑中期：Ｇｌｕ处理组显著高于对照组（Ｐ＜０．邋０５）邋；邋２－ｃｅｌｌ晚期：Ｇｌｕ处理组显著高逡逑于对照组（Ｐ＜0．邋０５），与２－ｃｅｌ丨中期胚胎内ＧＰｘｌ基因的ｍＲＮＡ表达水平呈现逡逑出相同的趋势。逡逑３．邋３．邋２小鼠ＭＺＴ期胚胎ＧＰｘ４基因的表达及量化分析逡逑３逦２「逦＾Ｍ１６逡逑0逦Ｑ邋Ｇｌｕ逡逑ｒｉ邋ｓｉ邋ｉ逡逑２祝啤期邋２－ｃｅｌｌ＿邋２￣ｃｅｔ咖逡逑图３－６邋ＧＰｘ４基因ＰＣＲ量化结果逡逑Ｆｉｇ邋３－６邋ＰＣＲ邋ｐｒｏｄｕｃｔｓ邋ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ邋ｒｅｓｕｌｔ邋ｏｆ邋ＧＰｘ４逡逑从量化分析图３－６可以看出，处于同…时期胚胎内ＧＰｘ４鸪因的ｍＲＮＡ农逡逑达水平，２－ｃｅｌｌ早期：Ｇｌｕ处理组显著高于对照组（Ｐ＜０＿邋０５）邋；邋２－ｃｅｌｌ中期：Ｇｌｕ逡逑处理组略高于对照组，无显著性左异（Ｐ＞0．0５）邋；邋２－ｃｅ丨丨晚期：Ｇｌｕ处那ｉｌｌＶ＃逡逑高于对照组（Ｐ＜0．0５）邋
本文编号：2747550
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S814
【图文】：
子的氧化还原反应产生特征荧光信号，检测昆明系小鼠胚胎ＭＺＴ期活性氧水平。逡逑随机收集各处理组ＭＺＴ期胚胎，避光染色，荧光显微镜观察，并进行拍照，利逡逑用Ｉｍａｇｅ软件对获得的荧光图片进行分析，获得荧光量化分析图，见图３－３。逡逑逦逦邋２「逦－Ｍ１６逡逑ＨＢ邋ｍ邋Ｉ邋［ｉ逡逑…邋３堓Ｖ；？．邋ｉ－＇逦２ｉｅｌｌ早朗邋２ｉｅｌｌ中期邋２ｉｅ＂灥逡逑２邋ｒ逦ｃ逦ｍ邋２－ｃｅｌ＾ＭＢ逡逑．逦｜逦＿逦Ｓ邋２＞ｃｅＪＩ中期逡逑ｓ邋Ｐ邋１－５逦＂逦ｂ邋ｍ逦甬邋２￣ｃｅｉ＿逡逑ＥＨ丨咖逡逑Ｍ１６逦Ｇｌｕ逡逑图３－３小鼠ＭＺＴ期胚胎ＤＣＨＦＤＡ染色图及量化结果（４００Ｘ邋）逡逑Ｍｇ邋３－３邋Ｍｏｕｓｅ邋ＭＺＴ邋ｅｍｂｉ７0ｓ邋ＤＣＨＦＤＡ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ邋ｆｉｇｕｒｅ邋ａｎｄ邋ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ邋ｒｅｓｕｌｔｓ邋（４００ｖ）逡逑注：Ａ．对照组；Ｂ．谷氨酸处理组逡逑Ｎｏｔｅ：Ａ．Ｃｏｎｔｒｏｌ；Ｂ．ＧＩｕ邋ｔｒｅａｔ逡逑从图３－３的荧光染色图可看出：谷氨酸处理组的荧光强度Ｖ著低Ｔ对照组（Ｐ逡逑＜０．邋０５）。从阁３－３的量化分析图可看出各试验组胚胎内活性较水平，即２－Ｃｅｌｌ逡逑２３逡逑
图３－４对照组和谷氨酸处理组的ＧＳＨ，ＲＯＳ相对水平逡逑Ｆｉｇ邋３－４邋Ｒｅｌａｔｉｖｅ邋ｌｅｖｅｌ邋ｏｆ邋ＧＳＨ，邋ＲＯＳ邋ｉｎ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋ａｎｄ邋Ｇｌｕ邋ｔｒｅａｔ逡逑如图３－４所示，是ＧＳＨ和ＲＯＳ分别在对照组和谷氨酸处理组水平（含景）逡逑的量化情况，从量化分析图不难看出，谷氨酸处理组：昆明小鼠ＭＺＴ＾ｆ同时期逡逑胚胎内ＧＳＨ水平均高于ＲＯＳ水平，无明显波动；々之相反，对照组：昆明小鼠逡逑ＭＺＴ晚期胚胎内ＧＳＨ水平低ＲＯＳ水平，且随将ＲＯＳ不断累积逐渐下降。本逡逑试验结果证实了谷氨酸能够使ＭＺＴ期胚胎内ＧＳＨ和ＲＯＳ水平含量保持相对稳逡逑定，为接下来的试验中研究谷胱甘肽氧化还原系统相关基因的ｍＲＮＡ表达规律逡逑提供…定理论基础。逡逑３．邋３小鼠ＭＺＴ期胚胎内谷胱甘肽氧化还原系统基因的表达分析逡逑本试验选取各试验组不同时期即２－细胞旱期、２－细胞屮期和２－细胞晚期丨Ｋ逡逑胎
图３－５邋ＧＰｘｌ基因ＰＣＲ量化结果逡逑Ｆｉｇ邋３－５邋ＰＣＲ邋ｐｒｏｄｕｃｔｓ邋ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ邋ｒｅｓｕｌｔ邋ｏｆ邋ＧＰｘｌ逡逑从量化分析图３－５可以看出，处于同－？时期胚胎内ＧＰｘｌ基因的ｍＲＮＡ表逡逑达水平，２－ｃｅｌｌ早期：Ｇｌｕ处理组略高于对照组，无显著性差异（Ｐ＞０．邋０５）邋；邋２－ｃｅｌｌ逡逑中期：Ｇｌｕ处理组显著高于对照组（Ｐ＜０．邋０５）邋；邋２－ｃｅｌｌ晚期：Ｇｌｕ处理组显著高逡逑于对照组（Ｐ＜0．邋０５），与２－ｃｅｌ丨中期胚胎内ＧＰｘｌ基因的ｍＲＮＡ表达水平呈现逡逑出相同的趋势。逡逑３．邋３．邋２小鼠ＭＺＴ期胚胎ＧＰｘ４基因的表达及量化分析逡逑３逦２「逦＾Ｍ１６逡逑0逦Ｑ邋Ｇｌｕ逡逑ｒｉ邋ｓｉ邋ｉ逡逑２祝啤期邋２－ｃｅｌｌ＿邋２￣ｃｅｔ咖逡逑图３－６邋ＧＰｘ４基因ＰＣＲ量化结果逡逑Ｆｉｇ邋３－６邋ＰＣＲ邋ｐｒｏｄｕｃｔｓ邋ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ邋ｒｅｓｕｌｔ邋ｏｆ邋ＧＰｘ４逡逑从量化分析图３－６可以看出，处于同…时期胚胎内ＧＰｘ４鸪因的ｍＲＮＡ农逡逑达水平，２－ｃｅｌｌ早期：Ｇｌｕ处理组显著高于对照组（Ｐ＜０＿邋０５）邋；邋２－ｃｅｌｌ中期：Ｇｌｕ逡逑处理组略高于对照组，无显著性左异（Ｐ＞0．0５）邋；邋２－ｃｅ丨丨晚期：Ｇｌｕ处那ｉｌｌＶ＃逡逑高于对照组（Ｐ＜0．0５）邋
【参考文献】
相关期刊论文 前5条
1 胡德宝;张宝修;张也;张日欣;方南洙;李钟淑;;氧化应激与胚胎的氧化还原调节[J];畜牧兽医学报;2014年07期
2 温兵强;蔡文涛;李俊杰;;谷胱甘肽对哺乳动物配子及胚胎作用的研究进展[J];中国草食动物科学;2012年S1期
3 韩岩;孙丽丽;张宇;李钟淑;方南洙;;谷氨酸对延边黄牛体细胞克隆重组胚发育的影响[J];湖北农业科学;2010年03期
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5 金春英;崔京兰;崔胜云;;氧化型谷胱甘肽对还原型谷胱甘肽清除自由基的协同作用[J];分析化学;2009年09期
本文编号：2747550
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