四种藏兽药和屎肠球菌乙酸乙酯提取物对大肠杆菌生物被膜的影响

发布时间：2020-07-15 10:48

【摘要】：大肠杆菌作为一种畜禽常见的肠道菌群,在广泛和持续的抗生素压力下能够形成细菌生物被膜来抵御外部生活环境的改变。随着超级耐药细菌的出现和多重耐药菌的数量增加,国内外许多研究者将目光转向新型抗菌药物的研制和开发,以期应对日益严重细菌耐药性问题,而植物药物和益生菌是其中比较活跃的新领域。因此,本研究选用四种藏兽药(华丽龙胆和岩生忍冬、偏翅唐松草、马蹄黄)和两株屎肠球菌(S16和S17)与常用抗生素进行联合药敏试验,探讨其对藏猪和藏鸡源大肠杆菌抗菌活性,以期为新型抗菌药物的开发和利用奠定基础。方法:(1)采用常规方法对203份采自藏猪和藏鸡的粪便、尿液、鸡蛋及其周围的土壤和水体样本进行大肠杆菌分离和鉴定。(2)采用改良结晶紫半定量法和微量肉汤稀释法分别对分离的大肠杆菌进行生物被膜形成能力分析和12种常用抗菌药物药物敏感性试验。(3)以筛选到的10株强生物被膜形成能力和多重耐药大肠杆菌为研究对象,采用联合药敏试验方法评价四种藏兽药(马蹄黄、偏翅唐松草、华丽龙胆和岩生忍冬)不同提取成分和屎肠球菌细菌素与高耐药率抗生素对其联合杀菌活性,并筛选其呈协同性的药物组合。(4)以E6株为研究对象,采用快速银染法观察其胞外多糖的相对多少验证其生物被膜形成能力,探讨筛选的药物组合对其生物被膜清除作用。结果:(1)从203份样本中共分离到大肠杆菌152株,其中藏猪源大肠杆菌63株,鸡源大肠杆菌84株,环境土壤源大肠杆菌1株,猪尿源大肠杆菌2株,鸡蛋源大肠杆菌2株,大肠杆菌总分离率为74.88%。(2)152株分离菌株主要集中于中等成膜能力和无成膜能力两个表型,OD_(570)比值处于1和4之间;用WHONET 5.6软件分析结果表明,152株分离菌株对氯霉素、磺胺二甲基嘧啶、土霉素、氨苄西林、磺胺甲VA唑的耐药率均高于90%,其中氨苄西林的耐药率高达100%;对二氟沙星、环丙沙星、阿米卡星、头胞噻呋、妥布霉素和头胞曲松的耐药率均低于50%,其中阿米卡星的敏感率最高,耐药率仅为19.90%;152株分离菌株分布较为分散,一共存在48种耐药谱型,其中12重耐药的菌株有12株,占7.89%,11耐的18株,占11.84%,6耐以上的菌株共有134株,共占93.41%。(3)四种藏兽药(马蹄黄、偏翅唐松草、华丽龙胆和岩生忍冬)对大肠杆菌抑菌效果较强成分和益生菌乙酸乙酯提取物与大肠杆菌高耐药率四种抗生素(氯霉素、土霉素、氨苄西林和磺胺甲VA唑)进行联合试验。试验结果表明:马蹄黄甲醇提取物对大肠杆菌的MIC范围处于3.93~15.63 mg/mL之间,与氯霉素、土霉素呈累加作用;与氨苄西林、磺胺甲VA唑呈无关作用;偏翅唐松草乙酸乙酯提取物对大肠杆菌的MIC范围处于3.93~31.52 mg/mL之间,与氯霉素呈协同作用,与土霉素呈、氨苄西林、磺胺甲VA唑呈累加作用;华丽龙胆甲醇提取物对大肠杆菌的MIC范围处于7.81~15.63 mg/mL之间,与氯霉素、土霉素和氨苄西林呈无关作用,与磺胺甲VA唑呈拮抗作用;岩生忍冬乙酸乙酯提取物对大肠杆菌的MIC范围处于7.81~31.52 mg/mL之间,与氯霉素呈累加作用,与土霉素和氨苄西林呈协同作用,与磺胺甲VA唑呈无关作用。屎肠球菌S16乙酸乙酯提取物大肠杆菌的MIC范围处于0.45~3.63 mg/mL之间,与氯霉素和磺胺甲VA唑呈无关作用,与土霉素和氨苄西林呈协同作用;屎肠球菌S17乙酸乙酯提取物大肠杆菌的MIC范围处于0.42~13.38 mg/mL之间,与氯霉素呈无关作用,与土霉素呈协同作用;与磺胺甲VA唑和氨苄西林呈相加作用。华丽龙胆甲醇提取物与两株屎肠球菌乙酸乙酯提取物呈累加作用;岩生忍冬乙酸乙酯提取物与屎肠球菌S17乙酸乙酯提取物呈协同作用,与屎肠球菌S16乙酸乙酯提取物呈累加作用;偏翅唐松草乙酸乙酯提取物与与两株屎肠球菌乙酸乙酯提取物均呈累加作用;马蹄黄甲醇提取物与屎肠球菌S16乙酸乙酯提取物呈无关作用,与屎肠球菌S17乙酸乙酯提取物呈累加作用。(4)E6株快速银染法表明其胞外多糖的分泌量较多,具有很强的生物被膜形成能力,四种藏兽药(马蹄黄、偏翅唐松草、华丽龙胆和岩生忍冬)不同提取成分对E6生物被膜的抑制率与药物浓度呈正相关。在MIC浓度下,岩生忍冬乙酸乙酯提取物与土霉素和氨苄西林联合应用对E6生物被膜的抑制率分别为48.92%和48.58%;偏翅唐松草乙酸乙酯提取物与土霉素和氨苄西林联合应用对E6生物被膜的抑制率分别为42.58%和47.84%,比单药的抑制率有显著性增强,证明了两者的联用功效。在MIC浓度下,屎肠球菌S16乙酸乙酯提取物与土霉素和氨苄西林联合应用对E6生物被膜的抑制率分别为41.53%和33.88%;屎肠球菌S17乙酸乙酯提取物与土霉素和氨苄西林联合应用对E6生物被膜的抑制率分别为32.37%和34.26%,比单药的抑制率有显著性增强,也证明了益生菌对抗生素的协同作用。岩生忍冬乙酸乙酯提取物与屎肠球菌S16和S17乙酸乙酯提取物联合应用对E6生物被膜的抑制率分别为37.33%和34.51%;偏翅唐松草乙酸乙酯提取物与屎肠球菌S16和S17乙酸乙酯提取物联合应用对E6生物被膜的抑制率分别为33.50%和35.61%,与单药的抑制率相比有显著性增强,再次证明两者联用对成熟生物被膜呈协同作用。
【学位授予单位】：西南民族大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S859.7
【图文】：

生物被膜,银染,大肠杆菌

A B图 4 大肠杆菌 E6 生物被膜银染结果注：A：空白对照；B：E6 银染图ure 4 The results of silver staining of Escherichia coli E6 biofilmote: A: Negative control; B: silver staining of Escherichia coli E6 E6 生物被膜的抑制率药敏试验结果筛选出两种藏兽药（岩生忍冬、偏翅唐松草）、两种西林、土霉素）、两株屎肠球菌乙酸乙酯提取物。了 6 种药物单用对大肠杆菌生物被膜的抑制率结果。从表中可见生跟所选药物的浓度呈正相关。药物在达到 1/4 MIC 浓度时，反而导增强。

【相似文献】