枯草芽孢杆菌对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1诱导表达的研究
发布时间：2020-07-19 17:53
【摘要】：防御素(defensins)是一类富含半胱氨酸的阳离子小分子抗菌肽,广泛分布于生物界中,是最大的内源性抗菌肽家族成员,β-防御素在绵羊瘤胃上皮细胞中的表达量最大,益生菌可作用于上皮细胞而提高机体免疫力。本研究选用益生枯草芽孢杆菌,研究其对体外培养的绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素表达的调节作用。首先,在体外培养绵羊瘤胃上皮细胞,然后用不同浓度的枯草芽孢杆菌分别对绵羊瘤胃上皮细胞进行不同时间的刺激,利用实时荧光定量PCR技术(realtime fluorescence quantitative PCR, RT-PCR)从mRNA水平及酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)技术从蛋白水平检测刺激后上皮细胞中绵羊β-防御素-1(Sheep Beta-Defensin-1, SBD-1)基因表达水平的差异,并对枯草芽孢杆菌对SBD-1诱导的信号通路进行了探讨。结果表明：菌液浓度为1010 cfu/mL且刺激时间为8h时,SBD-1的表达量最大,且不同的菌液浓度对SBD-1的表达均有诱导作用,通过比较,菌液浓度为109、1010、1011cfu/mL刺激下SBD-1的表达量与空白相比差异极显著(P0.01),且mRNA水平与蛋白水平的结果基本一致。枯草芽孢杆菌诱导SBD-1的表达是由丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路中的p38分裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)通路、c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路和细胞外信号调节蛋白激酶(ERK 1/2)通路介导的,并且p38 MAPK信号转导通路途径是主要通路。
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S826
【图文】：
逦‘逡逑用０．２５％的膜蛋白酶对瘤胃上皮组织进行连续消化后，实时在显微境下观察，当逡逑看到单个存在的、大小均一且折光度较高的细胞，并且数量较多时（图１），即可收逡逑集培养。所培养的细胞４ｄ后观察，贴壁的细胞有的单个存在，有的呈岛咱状出现，逡逑形态多为中间厚四周薄的楠圆形或圆形（图２）。培养６邋ｄ后观察，呈现为小岛鸣状的逡逑细胞团生长成了大片细胞（图３）。培养８邋ｄ后观察，片状细胞继续生长，相互连接在逡逑一起，细胞数量达到培养瓶的８０％？９０％，有的几乎铺满了整个细胞瓶，细胞状态很逡逑好，呈鹤巧石铺路状，形状多呈现为圆形或多角形，并且，界限较为清晰，因生长密逡逑运大，导致个别细胞的形态有所变化（图４），这时的细胞可Ｗ进行传代培养。逡逑：。，，画义秘；：＇；：：．一逦■逡逑V/U味婂义希у逋迹毕蟮牡拿嘌蛄鑫冈
本文编号：2762753
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S826
【图文】：
逦‘逡逑用０．２５％的膜蛋白酶对瘤胃上皮组织进行连续消化后，实时在显微境下观察，当逡逑看到单个存在的、大小均一且折光度较高的细胞，并且数量较多时（图１），即可收逡逑集培养。所培养的细胞４ｄ后观察，贴壁的细胞有的单个存在，有的呈岛咱状出现，逡逑形态多为中间厚四周薄的楠圆形或圆形（图２）。培养６邋ｄ后观察，呈现为小岛鸣状的逡逑细胞团生长成了大片细胞（图３）。培养８邋ｄ后观察，片状细胞继续生长，相互连接在逡逑一起，细胞数量达到培养瓶的８０％？９０％，有的几乎铺满了整个细胞瓶，细胞状态很逡逑好，呈鹤巧石铺路状，形状多呈现为圆形或多角形，并且，界限较为清晰，因生长密逡逑运大，导致个别细胞的形态有所变化（图４），这时的细胞可Ｗ进行传代培养。逡逑：。，，画义秘；：＇；：：．一逦■逡逑V/U味婂义希у逋迹毕蟮牡拿嘌蛄鑫冈
本文编号：2762753
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