山东省牛传染性鼻气管炎流行病学调查及一株IBRV的分离与鉴定

发布时间：2020-08-01 16:33

【摘要】：牛传染性鼻气管炎由属于I型疱疹病毒的牛传染性鼻气管炎引起,除导致发病牛高热、流鼻液、呼吸困难外,亦可造成病牛增重缓慢、产奶量下降、流产等,严重危害养牛业的发展。为进一步了解山东省部分牛场牛传染性鼻气管炎感染情况,本研究对山东省部分牛场进行牛传染性鼻气管炎的流行病学调查,在流行病学调查过程中成功分离到一株牛传染性鼻气管炎病毒并对其进行了初步研究,主要内容如下:1、山东省部分牛场牛传染性鼻气管炎流行病学调查选取济南、泰安、德州、东营、潍坊、临沂等6地15个奶牛场开展流行病学调查,共计获得血清样品1981份,其中犊牛血清样品489份,成年牛血清样品1492份,分别采用ELISA与微量血清中和法测定血清样品中的中和抗体,结果显示,使用ELISA法检测,14/15的牛场为IBRV gB抗体阳性,场阳性率为93.3%,说明山东省的牛场普遍感染IBRV。进一步分析可知,不同地区、不同牛场、犊牛与成年牛的抗体阳性率差异很大,并无明显相关性。随机选出部分ELISA检测为阴性、阳性的样品进行微量血清中和法检测,结果显示,中和抗体检测SN值小于5.66可作为IBRV抗体阴性的标准,微量血清中和法的阳性检出率略低于ELISA法。2、一株牛传染性鼻气管炎病毒的分离鉴定在进行流行病学调查的过程中分离到一株病毒,样品经PCR鉴定、序列分析、接种MDBK细胞、动物回归等试验验证,证明分离获得的毒株为牛传染性鼻气管炎病毒,将其命名为IBRV-TA株。
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S858.23;S852.653
【图文】：

基因组结构

用 5%的甲醛溶液灭活仅需 1min。1.1.3主要的功能基因病毒基因组全长约 135Kb，被两个重复序列单位（分别为 IR、TR）分割成 1 个长独特区（UL）和 1个短独特区（US），其中 IR、TR 和夹在中间的 US可沿轴旋转180 度，从而使病毒的 DNA 分子具有两种异构体（Mayfield 等，1983）。尽管 IBRV的基因组分子量大，且 G+C 含量高，但随着测序技术的发展，于 1995 年通过国际合作完成第 1株 IBRV 的测序（Genbank 编号为 AJ004801），AJ004801 由不同毒株（Cooper、P8-2、34、Jura 株）的测序数据综合而得，测序结果显示病毒共有 73 个开放阅读框（ORF），IBRV 大部分基因都由 ORF 组成。病毒基因组包含 10 个编码糖蛋白的基因，其中 6 个基因位于 UL，分别为 gK (UL53)、gC (UL44)、gB (UL27)、gH(UL22)、gM (UL10)和 gL(UL1)，其余 4 个基因位于 US，分别为 gG (UL4)、gD (UL6)、gI (US7)和 gE (US8)，如图 1。

ELISA法检测,阳性率,抗体,临沂

DZ5 14.1%（14/99）东营DY1 32.6%（47/144）DY2 15.3%（27/176）潍坊 WF1 13.9%（11/79）临沂LY1 4.2%（2/47）LY2 9.9%（12/121）表 9 不同地区ELISA法检测抗体平均阳性率汇总（2016~2018年）Table 9 Summary of detection of antibody average positive rate by ELISA in different areas (2016~2018)地区不同地区ELISA法检测抗体平均阳性率济南 10.2%泰安 58.0%德州 12.4%东营 20.3%潍坊 18.5%临沂 5.0%

临床样品,过滤除菌,样品,包图

鉴定与蚀斑纯化.45μm滤器过滤除菌后接种MD，每天观察出现CPE情况。如为细胞圆缩，收获后为F0 代；CPE。将 2 号样品F0 与其他样种MDBK细胞，2 号样品F0 接葡萄串状，收获后为F1 代。其CPE，说明鼻拭子样品中不包图 3 临床样品 PCR 结果Fig.3 PCR result of clinical samplesrker； 1~4：1~4号临床样品；5：阳性对

【参考文献】