欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒生物学特性的研究及其反向遗传平台建立

发布时间：2020-08-12 10:58

【摘要】：猪流感(Swine Influenza,SI)是由猪流感病毒(Swine Influenza Virus,SIV)引起的急性、热性、群发性和传染性呼吸道疾病。目前,猪群中流行的主要亚型有H1N1、H1N2和H3N2,其中欧洲类禽H1N1亚型和古典H1N1亚型是我国的主要流行株。为了查明欧洲类禽H1N1亚型SIV在国内猪群中的流行情况,本研究以欧洲类禽H1N1亚型SIV(A/swine/Tianjin/6/2011(H1N1),简称TJ6)为抗原,通过血凝抑制试验,对2014至2016年间福建、河北、黑龙江、山东、广东、江苏、浙江、上海采集到的共1080份猪血清样品进行了抗体水平的检测,研究结果显示,上述地区欧洲类禽H1N1亚型SIV抗体阳性率分别为:31.9%、19.5%、37.5%、22.2%、79.6%、56.9%、41.4%、51.9%,表明欧洲类禽H1N1亚型SIV在我国猪群中广泛传播且稳定存在。本研究以MDCK细胞和BALB/c小鼠为模型,开展了欧洲类禽H1N1亚型SIV病毒生物学特性的研究。以0.001个MOI的病毒剂量,将TJ6接种MDCK细胞,进行病毒在细胞上生长曲线的测定,然后按照104个TCID50对小鼠进行攻毒,测量其体重变化情况以及肺研磨液的病毒滴度。研究结果显示,TJ6在MDCK细胞上引起明显的细胞病变(CPE),病毒滴度在接种后48小时到达最高;小鼠TJ6攻毒组中第3天左右出现小鼠体重最低值,且其肺研磨液中能够检测到病毒,之后体重回升,该病毒能够造成小鼠明显的体重变化及病理组织变化。本研究进行了反向遗传操作平台的构建。利用RT-PCR技术扩增TJ6的8个基因片段,将其连接到双向表达载体PBD上,然后将8个阳性重组质粒共转染293T细胞,54h后收取细胞上清液,接种MDCK细胞,当细胞脱落后收集上清,进行血凝试验,测得血凝效价为1:32。对拯救得到的病毒扩增其8个基因片段并进行序列测定,其测序结果与原毒株保持一致,细胞病变情况无明显差别,证明病毒拯救成功。
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S852.651

【参考文献】

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本文编号：2790444