无乳链球菌重组GapC蛋白与脂蛋白（a）的相互作用

发布时间：2020-08-15 12:03

【摘要】：GapC蛋白是无乳链球菌(Sterptococcus agalactiae)表面的纤溶酶原(Plasminogen,Plg)受体之一,该蛋白可通过其C末端的赖氨酸残基与Plg的赖氨酸结合位点(Lysine binding site,LBS)结合。由于Plg与脂蛋白(a)[Lipoprotein(a),Lp(a)]结构中的载脂蛋白(a)[Apo(a)]具有高度同源性,故本文旨在研究GapC蛋白与Lp(a)的相互作用。利用大肠杆菌原核表达系统重组表达了无乳链球菌的gapC基因及缺失编码末位赖氨酸三碱基的突变体基因gapC△K,经TALON SuperflowTM填料过柱纯化后,得到对应重组蛋白rGapC和rGapC△K,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、亲和色谱层析(Pull down)及蛋白质印迹法(Western Blot)研究rGapC与Lp(a)的相互作用。实验结果发现,rGapC能与Lp(a)结合,且结合值明显高于rGapC△K;rGapC和rGapC△K均不与对照低密度脂蛋白Low density lipoprotein(LDL)结合;rGapC能与Plg结合,且结合值高于rGapC△K;赖氨酸类似物6-氨基乙酸(EACA)可以抑制rGapC与Lp(a)的结合;Lp(a)能抑制rGapC和Plg结合,但抑制作用不显著。结果表明,rGapC能与Lp(a)的结合,且是通过rGap C的C末端的赖氨酸残基与Lp(a)的Apo(a)中LBS结合的,本研究首次探究了rGapC与Lp(a)的结合作用及主要结合位点,为进一步研究Lp(a)的生理作用和与微生物的关系提供参考依据。
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S852.61
【图文】：

Plg的结构

无乳链球菌重组 GapC 蛋白与脂蛋白（a）的相互作用Plg 激活的抑制是由丝氨酸蛋白酶抑制剂调控的，包括 Plg 激活抑inogen activator inhibitors, PAIs）、α2 抗纤溶酶（α2-antiplasmin，α2球蛋白（α2-microglobalin）[8]。病原菌利用宿主 Plg 的致病机制病原菌可以黏附于 ECM、BM 等组织屏障结构，通过其表面的 Plg 受 结合，PAs 将 Plg 激活为 Pm 后，进一步降解 ECM、BM，使得病原菌屏障的渗透力，加剧机体感染风险[8]。有实验研究表明，赖氨酸类似度上抑制这类受体蛋白与 Plg 的结合，这暗示该种结合可能是受体蛋残基与 Plg 含有的 LBS 的特异性结合（图 2）。

Lp(a)和Plg的结构

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 许颖;纪智星;韩润林;;重组金黄色葡萄球菌次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶与脂蛋白(a)的相互作用[J];微生物学通报;2011年09期

2 代霄燕;许丽萍;白文成;韩润林;;重组A群链球菌三磷酸甘油醛脱氢酶与脂蛋白(a)的相互作用[J];内蒙古农业大学学报(自然科学版);2011年03期

本文编号：2794082