SOX5影响小鼠皮肤黑色素细胞MITF-M表达和黑色素生成

发布时间：2020-08-26 05:04

【摘要】：旨在探讨SOX5在小鼠皮肤毛色中的作用。本研究随机选取出生后12d的C57BL/6品系黑色、棕色、灰色小鼠各3只,采用实时荧光定量PCR、Western blotting和免疫组织化学方法对SOX5在黑色、棕色和灰色小鼠皮肤中的表达差异进行分析;并构建SOX5真核表达载体;运用体外转染的方法,转染小鼠黑色素细胞并检测与色素形成相关基因的表达水平,同时测定黑色素含量。结果表明:1)SOX5在不同毛色小鼠皮肤中均有表达,SOX5在黑色和灰色小鼠皮肤中mRNA和蛋白相对表达量高于棕色小鼠皮肤,均差异极显著(P0.01);且其主要表达部位为毛囊外根鞘。2)转染组与空载组相比,MITF-M、TYR、TYRP1、TYRP2、PMEL、OA1表达量均显著(P0.05)或极显著(P0.01)升高,黑色素含量也极显著增加(P0.01)。3)过表达MITF-M对SOX5存在负反馈作用。综上表明,SOX5通过调控MITF-M影响色素的生成进而参与毛色的形成。
【图文】：

肤黑色素细胞ＭＩＴＦ－Ｍ表达和黑色素生成Ｃｏｎｔｒｏｌ．正常黑色素细胞；Ｖｅｃｔｏｒ－ＧＦＰ．转染空载体的黑色素细胞；Ｖｅｃｔｏｒ－ＧＦＰ－ＳＯＸ５．转染ＳＯＸ５的黑色素细胞。下同Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｎｏｒｍａｌｍｅｌａｎｏｃｙｔｅｓ；Ｖｅｃｔｏｒ－ＧＦＰ．Ｔｈｅｍｅｌａｎｏｃｙｔｅｓｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈｅｍｐｔｙｖｅｃｔｏｒ；Ｖｅｃｔｏｒ－ＧＦＰ－ＳＯＸ５．Ｔｈｅｍｅｌａｎｏ－ｃｙｔｅｓｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈＳＯＸ５．Ｔｈｅｓａｍｅａｓｂｅｌｏｗ图３ＳＯＸ５转染后黑色素细胞的形态Ｆｉｇ．３ＭｏｒｐｈｏｌｏｇｙｏｆｍｅｌａｎｏｃｙｔｅｓｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｂｙｔｈｅＳＯＸ５２．５黑色素细胞中ＳＯＸ５的转染效率过表达ＳＯＸ５后经检测空载组（Ｖｅｃｔｏｒ－ＧＦＰ）与正常组（Ｃｏｎｔｒｏｌ）中ＳＯＸ５表达量无显著差异，试验组（Ｖｅｃｔｏｒ－ＧＦＰ－ＳＯＸ５）中ＳＯＸ５ｍＲＮＡ升高１８．８０倍（Ｐ＜０．０１）（图４Ａ）；蛋白升高１．６９倍（Ｐ＜０．０５）（图４Ｂ，Ｃ）。２．６ＳＯＸ５与ＭＩＴＦ－Ｍ表达的相互影响过表达ＳＯＸ５后结果显示：与空载组（Ｖｅｃｔｏｒ－ＧＦＰ）对比，试验组（Ｖｅｃｔｏｒ－ＧＦＰ－ＳＯＸ５）的ＭＩＴＦ－ＭｍＲＮＡ升高１．５０倍（Ｐ＜０．０５）（图５Ａ）；蛋白升高１．９５倍（Ｐ＜０．０１）（图５Ｂ，Ｃ）。为了进一步说明ＳＯＸ５与ＭＩＴＦ－Ｍ的关系，过表达ＭＩＴＦ－Ｍ后使ＳＯＸ５的ｍＲＮＡ降低１．３４倍（Ｐ＜０．０５）（图５Ｄ）；蛋白降低

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本文编号：2804735