牛蛙皮肤抗菌肽Catesbeianin-1在PichiaPink中表达条件的优化及其粗提物对产蛋后期鸡的影响

发布时间：2017-04-01 11:07

  本文关键词：牛蛙皮肤抗菌肽Catesbeianin-1在PichiaPink中表达条件的优化及其粗提物对产蛋后期鸡的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：两栖类脊椎动物由于是从水生过渡到陆生,因而具有水生与陆生的双重特性。它们的皮肤具有免疫防御的作用,在抵御环境病原微生物的侵袭方面具有重要作用,皮肤表面含有大量的粘液,在粘液中含有大量的抗菌活性物质,而抗菌肽正是其中最主要的物质之一,它们分子结构特殊、功能复杂多样。抗菌肽在自然界中广泛存在,具有较好的生物学活性,分子量小,大多是2000~7000bp左右,由20~60个氨基酸组成。由于抗生素的滥用,造成了大量的耐药菌株出现,不仅为生产业造成了巨大的经济损失,也造成了对环境的严重污染。越来越多的研究表明,抗菌肽具有广谱抗菌,不易使细菌产生耐药性,不会造成药物的残留等优点,受到人们的广泛关注。毕赤酵母表达系统近年来发展较为迅速,多用于进行外源蛋白的表达。该系统的优点:具有醇氧化酶1(AOX1)基因的启动子,以甲醇为唯一碳源进行发酵表达,在有氧条件下进行高密度发酵,表达的外源蛋白具有生物学活性等。而Pichia Pink表达系统是在巴斯德毕赤酵母表达系统的基础上发展起来的又一种真核重组蛋白表达系统。该系统除了上述优点外,其内的菌株属于蛋白酶缺陷型,减少了外源蛋白的降解,另外,其内含有高拷贝数表达载体,能进行外源蛋白的高效表达。本实验室利用Pichia Pink表达系统成功构建酵母重组牛蛙抗菌肽Catesbeianin-1。本研究在前期研究的基础上,以挡板瓶对重组酵母进行发酵表达,探索最适发酵条件。研究表明,该重组酵母的发酵温度为28℃,发酵初始浓度OD600约为0.2,种子菌培养12h,甲醇添加量为2.5%,能有效缩短发酵时间,蛋白分泌表达量最高,使用发酵成本最低,其中重组酵母表达的粗蛋白含量约为5.0 mg/ml。对分泌表达的抗菌肽Catesbeianin-1进行革兰氏阴性菌抑菌活性检测,发现对大肠杆菌O157和O78、肠炎沙门菌CMCC50041等10种菌具有较好的抑菌活性。为了研究抗菌肽Catesbeianin-1粗提物对产蛋后期鸡的影响,对380日龄产蛋鸡进行饲喂实验。发现饲喂了抗菌肽Catesbeianin-1粗提物的蛋鸡产蛋率提高了约3.0%,同时增加了蛋壳的厚度,在一定程度上提高了蛋品质,同时蛋鸡的免疫能力也得到了一定程度的提高。本研究为基因工程抗菌肽作为饲料添加剂的临床应用提供了参考依据和理论基础。
【关键词】：毕赤酵母 抗菌肽 优化表达 产蛋后期鸡
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S831.5
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 英文缩写词表8-10
• 引言10-11
• 第一篇 文献综述11-22
• 第1章 抗菌肽的研究进展11-22
• 1.1 抗菌肽的来源11-13
• 1.2 抗菌肽的结构特点13-14
• 1.3 抗菌肽的生物学功能14-17
• 1.4 抗菌肽的作用机制17-19
• 1.5 抗菌肽在动物生产上的应用19-21
• 1.6 毕赤酵母表达外源蛋白的制约因素21-22
• 第二篇 研究内容22-48
• 第1章 酵母重组抗菌肽Catesbeianin-1 摇瓶发酵条件的优化22-34
• 1.1 材料与方法22-26
• 1.2 结果26-31
• 1.3 讨论31-33
• 1.4 小结33-34
• 第2章 抗菌肽Catesbeiania-1 粗提物对产蛋后期鸡的作用34-48
• 2.1 材料与方法34-38
• 2.2 结果38-44
• 2.3 讨论44-46
• 2.4 小结46-48
• 结论48-49
• 参考文献49-57
• 导师简介57-58
• 作者简介58-59
• 致谢59

【参考文献】

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本文编号：280507