猪毛发中同化激素的多残留检测及17α-甲基睾酮蓄积规律研究

发布时间：2017-04-01 21:08

  本文关键词：猪毛发中同化激素的多残留检测及17α-甲基睾酮蓄积规律研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：同化激素(Anabolic Hormones)是由天然性激素经过结构改造而得到的半合成类固醇激素,以降低性激素活性、提高蛋白同化活性。由于同化激素能减少脂肪沉积、提高瘦肉比率、改善饲料转化效率,自上世纪50年代开始曾被大量使用在食品动物。长期食用含有此类同化激素的动物可食性组织可给人类带来健康风险。因此,自1988年便已被欧盟禁止作为促生长剂用于畜禽养殖,我国农业部235公告也明确禁止17α-甲基睾酮和群勃龙使用于所有动物,并不得在所有可食性组织中检出。本研究建立了猪毛发中8种同化激素(睾酮、17α-甲基睾酮、群勃龙、群勃龙醋酸酯、勃地龙、苯丙酸诺龙、诺龙、炔诺酮)的液相色谱-串联质谱多残留检测方法;并研究了多剂量内服、单剂量肌注两种不同给药方式下,17α-甲基睾酮在猪毛发中的蓄积规律。毛发样品经三(2-羧乙基)膦盐酸盐水解、叔丁基甲醚提取、C18固相萃取柱净化,最后经流动相复溶。以0.1%甲酸水溶液(A)和乙腈(B)为流动相,采用Agilent Zorbax SB-Aq色谱柱对8种同化激素进行分离;在电喷雾离子源、正离子扫描、多反应监测模式下对目标化合物进行定量分析。梯度洗脱程序为:0.0~1min,30%B;1.0~3.0 min,55%B;6~12 min,98%B;12.5~18 min,30%B。进样量5μL。8种同化激素在猪毛发中的检测限为0.3~3 ng/g,定量限为0.75~6 ng/g;在10~1000 ng/g的浓度范围内线性关系良好(r20.99);低、中、高三个添加水平的平均回收率为75.2~112.7%;批内变异系数为1.4~8.2%,批间变异系数为2.5~8.6%。方法稳定性好、灵敏度高,满足多残留检测的要求。选用体重为(20.0±3.5)kg的杜长大三元杂交猪6头,随机分两组。一组按4 mg/kg体重内服17α-甲基睾酮、连续给药30天,另一组按4 mg/kg体重单剂量肌肉注射17α-甲基睾酮,毛发样品均采集到首次给药后第61天。以时间为横坐标、浓度为纵坐标,分析17α-甲基睾酮在猪毛发中的残留规律。结果表明,多剂量内服给药组,第一次给药后第10天,毛发中药物浓度达到峰值,而后出现下降,到约16天后趋于稳定,停药后逐渐下降;单剂量肌注给药组,在给药后第10天达到药物浓度峰值,而后迅速下降;两种给药途径,在给药后第61天均仍能检测到17α-甲基睾酮。相对于血浆、尿液、组织这些常规检测基质的短期检测,使用毛发作为检材满足了长期检测的需求,大大延长了违禁药的检测时间窗口。根据其蓄积规律还可以大致推断出动物违规使用17α-甲基睾酮时间点。本研究为监控同化激素在猪的违规使用提供了毛发中高灵敏的多残留检测方法,并以17α-甲基睾酮为代表药物,通过对不同时间点的药物浓度进行分析,推断药物违禁使用时间窗,为违禁药使用后的监控提供了科学评价依据。
【关键词】：同化激素 液相色谱-串联质谱法 17α-甲基睾酮 猪毛发 蓄积规律
【学位授予单位】：华南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S859.8
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-12
• 1 前言12-21
• 1.1 同化激素研究进展12-15
• 1.1.1 激素类药物12
• 1.1.2 同化激素类药物12-15
• 1.1.3 同化激素类药物应用及危害15
• 1.2 同化激素类药物检测方法15-19
• 1.2.1 检测基质15-16
• 1.2.2 检测方法16-19
• 1.3 药物在毛发中的残留检测及蓄积性研究19-20
• 1.3.1 同化激素在毛发中的残留及蓄积19-20
• 1.3.2 其他药物在毛发中的残留及蓄积20
• 1.4 本研究的目的与意义20-21
• 2 8种同化激素在猪毛发中的残留检测方法21-40
• 2.1 材料与方法21-25
• 2.1.1 药品与试剂21
• 2.1.2 仪器与设备21-22
• 2.1.3 溶液配制22
• 2.1.4 毛发收集22
• 2.1.5 LC-MS/MS条件的优化22-23
• 2.1.6 提取方法的优化23
• 2.1.7 除脂23-24
• 2.1.8 方法学评价24-25
• 2.2 结果25-38
• 2.2.1 LC-MS/MS条件的确定25-26
• 2.2.2 提取方法的确定26-28
• 2.2.3 除脂28
• 2.2.4 方法学评价28-38
• 2.3 讨论38-40
• 2.3.1 提取方法38-39
• 2.3.2 除脂39
• 2.3.3 方法学评价39-40
• 3 17α-甲基睾酮在猪毛发中的蓄积规律研究40-52
• 3.1 试验方法40-42
• 3.1.1 试验动物40
• 3.1.2 动物试验40
• 3.1.3 毛发水解方法的优化40-41
• 3.1.4 样品前处理41
• 3.1.5 标准曲线41-42
• 3.2 结果42-49
• 3.2.1 毛发水解方法的确定42-44
• 3.2.2 标准曲线44
• 3.2.3 毛发样品中17α-甲基睾酮的浓度44-49
• 3.3 讨论49-52
• 3.3.1 方法适用性49-50
• 3.3.2 17α-甲基睾酮在猪毛发中的蓄积规律50-52
• 全文总结52-53
• 致谢53-54
• 参考文献54-59
• 附录 硕士期间发表论文情况59

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 张怡;李艳芹;赖丽虹;姬竹玲;任妙贤;方炳虎;;液相色谱-串联质谱法测定猪血浆和尿液中8种同化激素的残留[J];动物医学进展;2015年06期

2 陈晓红;姚珊珊;赵永纲;金米聪;;超快速液相色谱-串联质谱法测定血浆中8种蛋白同化激素含量[J];中国临床药学杂志;2012年06期

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7 林奕芝,张世英,梁伟,刘奋,司徒潮满,戴京晶;高效液相色谱法测定肉中激素残留量[J];现代预防医学;2002年06期

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本文编号：281291