硒对DON染毒猪脾脏淋巴细胞部分细胞因子和免疫球蛋白的影响

发布时间：2020-09-11 12:33

　　脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)是饲料中检出率最高的霉菌毒素。DON可通过氧化损伤促进淋巴细胞凋亡,降低动物机体免疫力。硒具有抗氧化,提高动物机体免疫力等生物学特性。本研究以体外培养的原代猪脾脏淋巴细胞为模型,探究亚硒酸钠(Na_2SeO_3)对DON染毒猪脾脏淋巴细胞部分细胞因子和免疫球蛋白的影响。试验分为空白对照组(C组),硒单独作用组(S组,Na_2SeO_3的浓度为2μmol/L),DON单独作用组(分为D1、D2、D3、D4组,DON浓度分别为100 ng/mL、200 ng/mL、400ng/mL、800 ng/mL),硒和DON共同作用组(分为SD1、SD2、SD3、SD4组,Na_2SeO_3和DON的浓度分别为2μmol/L和100 ng/mL、2μmol/L和200 ng/mL、2μmol/L和400ng/mL、2μmol/L和800 ng/mL)。培养12 h、24 h和48 h后,采用ELISA和qRT-PCR分别检测体外培养猪脾脏淋巴培养上清液中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ、IgG和IgM蛋白含量及细胞内mRNA表达水平的变化。研究结果如下:(1)在12 h、24 h和48 h时,与空白对照组相比,除D1组个别指标外,DON单独作用组中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ、IgG和IgM蛋白含量和mRNA表达水平显著降低(P0.05)。表明DON可降低部分猪脾脏淋巴细胞细胞因子和免疫球蛋白蛋白含量和基因的表达水平。(2)在12 h、24 h和48 h时,与空白对照组相比,硒单独作用组IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ、IgG和IgM蛋白含量和mRNA表达水平显著升高(P0.05)。表明硒可提高猪脾脏淋巴细胞中部分细胞因子和免疫球蛋白含量和基因的表达水平。(3)在12 h、24 h和48 h时,硒和DON共同作用组中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ、IgG和IgM蛋白含量和基因表达量高于其相对应DON单独作用组,但低于空白对照组。表明硒能缓解DON所致的猪脾脏淋巴细胞细胞因子和免疫球蛋白的降低。结论:硒在一定程度上可拮抗DON致脾脏淋巴细胞的细胞免疫和体液免疫的损伤作用。
【学位单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S816;S859.8
【部分图文】：

化学结构,脱毒方法,卫生组织,国际研究

织和世界卫生组织等列入了国际研究的首要问题，呼吁全球要对其高具有耐酸耐碱耐高温等特性，很难降解，动物食入 DON 后，会引起不良症状，还可影响动物的免疫功能[35]。下文主要围绕 DON 的理化DON 对免疫器官的毒性、DON 诱导淋巴细胞的凋亡、对细胞因子和以及 DON 的脱毒方法展开论述。ON 的理化性质

猪脾脏,脾脏淋巴细胞,细胞悬液,离心管

采用 SPSS 20.0 统计软件进行单因素方差分析，并用 Duncan果采用x ± SD表示，采用 P < 0.05 分析其显著性差异，试验m 5 作图。淋巴细胞的分离结果可见，图 A 为离心前脾脏组织细胞悬液和分离液，由于脾脏淋巴液小，所以脾脏组织细胞悬液在离心管的上层，分离液在离心管液包括脾脏淋巴细胞、巨噬细胞、红细胞、血小板、粒细胞等，平离心后分层，从而得到我们所需的脾脏淋巴细胞。图 B 表示脾后，从上到下依次是稀释液层、环状乳白色淋巴细胞层、透明的分

形态图,猪脾脏,倒置显微镜,形态

13图 2-3 倒置显微镜下猪脾脏淋巴细胞的形态(400×)Figure 2-3 The morphology of porcine splenic lymphocytes under inverted microscope图 2-2 为瑞氏姬姆萨复合染液染色的细胞涂片，放大倍数为 400×，视野中几有细胞的细胞核呈紫红色，浆呈淡蓝色，可断定分离细胞为猪脾脏淋巴细胞，且分纯度较高，无其他杂细胞。图 2-3 左图为 6 孔板培养 0 h 的猪脾脏淋巴细胞，放大倍数为 400×，细胞均散，轮廓清晰，折光性好。图 2-3 右图为 6 孔板培养 48h 后的猪脾脏淋巴细胞，放数为 400×，细胞轮廓清晰，折光度良好，说明细胞培养良好。由于猪脾脏淋巴细悬浮细胞，所以在培养液中增殖后为葡萄状，如箭头所示。

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