苹果多酚对小鼠巨噬细胞基因表达及NO与细胞因子产生的影响

发布时间：2020-09-14 09:38

　　苹果多酚(Apple Polyphenol,AP)是苹果中多酚类物质的总称,具有抗氧化、清除自由基、抑菌、抗癌、抗突变及防衰老等功能。本实验通过MTT测定及形态观察,检测不同浓度苹果多酚对巨噬细胞活性及生长的影响;利用基因芯片分析苹果多酚对巨噬细胞基因表达谱的影响;应用实时荧光定量PCR对6个基因表达谱芯片分析筛选出的差异基因进行了定量分析;应用微量法NO检测试剂盒及ELISA试剂盒测定苹果多酚对巨噬细胞NO、TNF-α、IL-1α、IFN-γ产生的影响;主要研究结果如下:1.MTT测定及形态学观察表明:苹果多酚的浓度在20μg/mL以上时,可以抑制巨噬细胞的生长,与对照组相比差异显著(p0.05);浓度在10μg/mL时,促进巨噬细胞的生长,与对照组相比差异显著(p0.05);浓度为5μg/mL时,对细胞的生长没有明显的影响,与对照组相比差异不显著(p0.05);苹果多酚的浓度在25μg/mL以上时,引起小鼠巨噬细胞体积变小、圆形、脱落、固缩坏死成碎片;5-20μg/mL时,巨噬细胞多为圆形或椭圆形,极少数细胞为梭形,苹果多酚的最大安全浓度即确定为10μg/mL。2.苹果多酚作用于巨噬细胞后利用基因芯片技术进行数据分析,结果显示:以两倍变化为标准,共得到3149个差异表达基因,其中1540个基因在巨噬细胞中表达上调,1609个基因表达下调。GO分析结果显示,这些差异基因主要参与蛋白与核苷酸结合、DNA修复、细胞周期、细胞骨架与细胞核等功能。KEGG Pathway分析结果表明,差异基因涉及的信号通路包括类固醇生物合成、真核细胞核糖体合成、TNF信号通路、抗生素生物合成等。利用qPCR进一步验证TNF信号通路上相关差异基因的表达,其中Map3k8、Mlkl、Tnf表达显著下调(p0.05),而Pik3ca、Cflar、Atf_2下调不显著(p0.05)。3.NO及细胞因子检测结果显示:苹果多酚的浓度为2.5μg/mL、5μg/mL和10μg/mL时,NO的生成量随着苹果多酚浓度的升高而降低,与对照组相比差异显著(p0.05);浓度为0.625μg/mL、1.25μg/mL时,NO生成量与对照组相比差异不显著(p0.05);浓度为10μg/mL时,能够降低TNF-α、IL-1α及IFN-γ的表达水平,与对照组相比差异显著(p0.05)。本研究结果显示,基因芯片分析表明共有1540上调基因,1609个下调基因,这些基因主要参与蛋白结合、核苷酸结合、DNA修复等过程,分析结果为进一步研究苹果多酚的生物学作用提供参考;苹果多酚可能通过影响巨噬细胞TNF信号通路中相关基因的表达,从而介导巨噬细胞抗炎抗癌机制及免疫调节作用;苹果多酚可下调巨噬细胞TNF-α、IL-1α与IFN-γ及NO的生成量,从而具有一定的抗炎效果和免疫调节作用。
【学位单位】：甘肃农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S852.4
【部分图文】：

苹果多酚,巨噬细胞,差异显著

图 1-1 不同浓度苹果多酚对巨噬细胞生长的影响（n=4）*代表与正常对照组相比差异显著（p㩳0.05）；**代表与正常对照组相比差异极显著（p㩳0.01）Fig.1-1 Effects of different concentrations of apple polyphenols on multiplication capacity of macrophage*p㩳0.05, ** p㩳0.01versus control group

苹果多酚,差异显著

图 1-1 不同浓度苹果多酚对巨噬细胞生长的影响（n=4）与正常对照组相比差异显著（p㩳0.05）；**代表与正常对照组相比差异极显著（p-1 Effects of different concentrations of apple polyphenols on multiplication capacity of m*p㩳0.05, ** p㩳0.01versus control group

扫描图,基因表达谱芯片,扫描图

甘肃农业大学 2018 届硕士学位论文第二章苹果多酚对 RAW264.7 小鼠巨噬细胞基因表达谱的影响2.2 基因芯片杂交结果实验组与对照组 6 个样品的基因表达谱芯片杂交扫描结果（见图 2-1），图像亮度较好，图像清晰，荧光分布致密且均匀，说明该结果符合下一步实验要求。

【参考文献】