郁金散对大肠湿热证模型大鼠胃肠激素和HPA轴的影响

发布时间：2020-09-22 18:27

　　畜禽大肠湿热证是兽医临床常见多发证,以腹痛,腹泻,粪便黏腻,体温升高,口渴喜饮,脉滑数,舌苔黄等为主要临床症状。常见于现代医学的急性胃肠炎、细菌性痢疾等疾病。随着集约化养殖和畜禽流动性的增加,猪、牛和鸡等畜禽中与大肠湿热证相关的疾病呈明显上升趋势,对养殖业造成了巨大的经济损失。兽医临床实践及相关研究报道,传统中(兽)药郁金散对大肠湿热证有较好的治疗效果,是兽医临床治疗畜禽大肠湿热证的经典方剂之一。本研究在建立郁金散有效成分含量测定的基础上,通过建立大肠湿热证大鼠模型,应用高、中、低剂量郁金散进行治疗,检测各组大鼠血清及肠组织中胃肠激素的含量、肾上腺指数及血清中CRH、ACTH、CORT的含量。以期从胃肠激素和HPA轴角度,探讨郁金散对大肠湿热证的作用机理。主要研究结果如下:1.郁金散有效成分含量测定,采用ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6×150 mm,5μm),流动相:甲醇-0.2%水溶液、乙腈-10%醋酸水溶液,梯度洗脱,流速:1mL/min,检测波长:240 nm、275 nm、425 nm,柱温:25℃,进样量:20μL。结果显示黄芩苷、栀子苷、芍药苷、没食子酸、盐酸小檗碱、姜黄素和大黄素的质量浓度分别在1.373~21.24μg.ml~(-1)(r=0.9994),1.438~23.00μg.mL~(-1)(r=0.9999),1.900~30.50μg.mL~(-1)(r=0.9998),10.00~161.0μg.mL~(-1)(r=0.9996),11.90~190.0μg.mL~(-1)(r=0.9998),0.00748~0.036μg.mL~(-1)(r=0.9994),0.0038~0.019μg.mL~(-1)(r=0.9991)范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系。平均回收率(n=9)均在99.9%~103.6%范围内,RSD在0.3%-1.7%范围内。本方法简单可靠,可控性强,可快速测定郁金散中7种有效成分的含量。2.大肠湿热证模型建立及一般行为学观察Wistar大鼠60只,雌雄各半,随机分为正常对照组、模型组、自愈组、郁金散高、中、低剂量治疗组,通过自有饮用蜂蜜水,前10天禁食与饲喂充足饲料并灌胃猪油隔日交替进行;10-15天灌白酒,并置于高温高湿环境;然后腹腔注射大肠杆菌,24 h后再注射一次建立大肠湿热证大鼠模型。造模成功后,分别给予高、中、低剂量郁金散进行治疗。整个实验过程中观察大鼠的临床症状和体征,然后检测模型大鼠的血常规、血生化、血清炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、IL-17和IL-23水平以及回肠、结肠的病理变化。结果显示,模型大鼠的临床症状、体征与大肠湿热证诊断标准相吻合,且机体出现了炎症、血脂升高、肠粘膜受损、肠道淤血为特征的病理变化。各剂量郁金散治疗后均可改善其临床症状和体征,回调血常规、血液生化及血清炎性因子水平,减轻回肠及结肠的病理变化,并呈现出一定的剂量效应关系,且以高剂量治疗效果最好。3.血清及肠组织胃肠激素研究对各组大鼠血清、回肠及结肠组织中的胃肠激素含量进行了检测。结果显示,与正常对照组相比,模型组和自愈组大鼠血清、回肠及结肠组织中胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)、P物质(SP)含量极显著或显著升高(P0.01,P0.05),血管活性肠肽(VIP)无显著变化,生长抑素(SS)含量极显著降低(P0.01);与自愈组相比,各剂量郁金散治疗后,MTL、GAS、SP、VIP和SS都有不同程度的回调,以高剂量组回调最为明显,其中高剂量组大鼠血清、回肠、结肠中MTL、GAS和SP极显著或显著降低(P0.01,P0.05),SS极显著或显著升高(P0.01,P0.05)。4.HPA轴功能的研究对各组大鼠肾上腺指数及血清促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质醇(CORT)含量进行了检测。结果表明,与正常对照组相比,模型组和自愈组大鼠肾上腺指数及血清中CRH、ACTH、CORT的含量显著或极显著性升高(P0.05或P0.01);与自愈组相比,经各剂量郁金散治疗后,以上各指标都有不同程度的回调,以高剂量回调最为明显。综上所述,本实验成功运用了HPLC法同时测定郁金散中7种有效成分的含量,建立了大肠湿热证大鼠模型,郁金散对其有较好的治疗作用,通过抗腹泻、抗炎、降血脂、保护肠粘膜、调节胃肠激素紊乱及HPA轴功能亢进来治疗大肠湿热证。
【学位单位】：甘肃农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S853.74
【部分图文】：

示意图,郁金,活性成分,化学结构

2-1 郁金散中 7 种活性成分的化学结构示意图igure 2-1 The chemical structures of seven selected active components of YJP 材料与方法.1 实验仪器表 2-1 主要实验仪器Table 2-1 The necessary instruments for experiment仪器型号生产地高效液相色谱仪 1260 Infinity 美国安捷伦公司恒温水浴锅 HH-S 金坛市恒丰仪器厂数控超声波清洗器 KQ-300DE 昆山市超声仪器有限公司恒温水浴锅 HH-S 金坛市恒丰仪器厂

色谱图,没食子酸,黄芩苷,色谱图

18图 2-2 对照品（A）及供试品（B）分别在相应波长下的色谱图；1.黄芩苷；2.没食子酸；3.栀子苷；4.芍药苷；5.盐酸小檗碱；6.姜黄素；7.大黄素Figure 2-2. HPLC chromatogram of standard solutions (A) and sample solutions (B). 1. baicalin; 2.gallic acid; 3. geniposide; 4. paeoniflorin; 5. berberine; 6. curcumin; 7. emodin

精神状态,大鼠模型,肛周,高温高湿

图 3-1 大肠湿热证大鼠模型的症状（A），（B）和（C）表示正常大鼠、高温高湿下后大鼠的精神状态；（D）肛门红肿；（E）肛周和尾根污秽沾有黄色稀便；（F）黏液便；（（H）和（I）黄色稀黏便Fig. 3-1 The symptoms of LIDHS rat model. (A), (B) and (C) show the mental state of normratsinHTHE,andchallengedwithEscherichiacoli,respectively.(D)Theanuswasredands(E) Crissum and tail base were foul and covered with yellow loose stools. (F) Mucous stoo(H) and (I) loose, sticky and yellow stools.2.2 大鼠的体重变化各组大鼠体重如图 3-2，各组大鼠体重在造模前差异不显著，造模过程空白对照组大鼠体重逐渐增长，而其他各组在造模前 11 天体重增长缓慢呈形变化，饲喂充足饲料并灌油的一天体重上升，禁食的一天体重下降，但总

【参考文献】