我国部分地区规模化鹅场五种重要病毒病的流行病学调查

发布时间：2020-09-30 08:37

【摘要】：我国是世界养鹅大国,鹅的存栏量和出栏量一直稳居世界第一位。但是随着我国养鹅业的不断发展,鹅的饲养密度不断增大,发病率逐年增多,特别是小鹅瘟、禽流感、新城疫、坦布苏病毒感染和鹅圆环病毒感染等,它们单一感染或共感染,造成鹅的发病、死亡或生产性能降低,给养鹅业造成了巨大的经济损失。1、建立针对鹅病毒病的快速检测方法是进行流行病学调查的重要前提。本研究根据H9亚型禽流感病毒(H9-AIV)的HA基因、新城疫病毒的HN基因和坦布苏病毒的NS3基因的保守序列,设计合成3对特异性引物；采用Tizol法提取H9-AIV、NDV和TMUV的RNA并反转录为cDNA,混合后作为PCR体系模板。在普通PCR方法的基础上,通过对退火温度、ExTaq DNA聚合酶、Buffer浓度、2.5mmol/L dNTP浓度、引物浓度比等反应体系及条件进行优化,建立同时扩增H9-AIV (560bp)、NDV (427 bp)和TMUV (277 bp)的多重RT-PCR方法。经特异性、敏感性及临床验证性试验,结果表明：在同一RT-PCR反应体系中可以同时检测到这3种病毒,而对鹅呼肠孤病毒、鹅细小病毒、鸭呼肠孤病毒的检测均为阴性；H9-AIV、NDV和TMUV的最低检出限分别为5.8×105个拷贝、7.2x105个拷贝和4.6x105个拷贝。利用该方法对临床阳性样品进行检测验证,结果均一致。证明建立的多重RT-PCR方法可对H9-AIV、NDV和TMUV同时进行检测,具有简便快速、特异性好、灵敏度高、实用性强的特点,可为鹅群这三种疾病的检测和诊断提供快速准确的方法,便于及时有效的采取防控措施,减少养鹅业的损失。2、为了解小鹅瘟、H9亚型禽流感、新城疫、坦布苏病毒感染和鹅圆环病毒感染等重要鹅病毒病在我国的流行情况,本研究于2014-2015年间在我国11个主要养鹅省份的规模化鹅场,采集临床上发病鹅的病料478羽份,应用建立的针对H9-AIV、NDV和TMUV多重RT-PCR检测方法进行H9-AIV、NDV和TMUV的检测；应用建立的针对GPV和GoCV的普通PCR检测方法进行鹅细小病毒和鹅圆环病毒的检测；并对检测结果进行统计分析。结果表明478份样品中,单一感染190份,双重感染82份,三重感染30份,四重感染3份,阳性率分别为40%、17%、6%、1%,阴性感染173份,比例为36%; GPV、H9-AIV、NDV、TMUV和GoCV感染的阳性检出率分别为17.1%、21.7%、18.4%、17.4%和21.7%。 GPV、H9-AIV、TMUV和GoCV等病毒的感染中混合感染比例较高,分别为55%、62%、74%和54%, NDV感染中混合感染的比例相对较低,为44%。不同季节发病情况统计分析表明,H9和ND在春、冬季节的检出率最高,在夏、秋季节相对较低；TMUV和GoCV在夏季检出率较高,冬季检出率较低,GPV在春季检出率较高。不同日龄发病情况统计分析表明,H9和GoCV在不同日龄段检测的阳性率均很高,成年鹅中检测的阳性率最高；NDV、TMUV在不同日龄段检测的阳性率差异不显著,但雏鹅和成年鹅感染率偏高；GPV在雏鹅时的感染率较高,育成鹅和成年鹅也普遍存在被感染的情况,但感染率较低。综上所述,GPV、H9-AIV、NDV、TMUV和GoCV在我国大部分规模化鹅场中普遍存在,且单一感染和共感染的现象均十分严重；混合感染中以双重感染和三重感染为主,其中免疫抑制病病原体之间的共感染率较高,是造成我国规模化鹅场疫病防控复杂化的主要原因之一。
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.33
【文章目录】：
符号说明
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 鹅群中主要的病毒病
        1.1.1 鹅细小病毒病
            1.1.1.1 病原学
            1.1.1.2 流行病学
        1.1.2 禽流感
            1.1.2.1 病原学
            1.1.2.2 流行病学
        1.1.3 新城疫
            1.1.3.1 病原学
            1.1.3.2 流行病学
        1.1.4 坦布苏病毒病
            1.1.4.1 病原学
            1.1.4.2 流行病学
        1.1.5 鹅圆环病毒病
            1.1.5.1 病原学
            1.1.5.2 流行病学
    1.2 鹅群中主要的病毒病共感染的现状
    1.3 多重PCR检测技术的研究进展
        1.3.1 PCR技术的概述
        1.3.2 多重PCR原理
        1.3.3 引物
        1.3.4 反应体系和反应条件的优化
        1.3.5 多重PCR在病原检测中的应用
    1.4 研究目的和意义
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 病毒毒株
        2.1.2 主要试剂
    2.2 方法
        2.2.1 H9、NDV和TMUV三重RT-PCR检测方法的建立
            2.2.1.1 引物的设计与合成
            2.2.1.2 病毒的增殖
            2.2.1.3 病毒RNA的提取
            2.2.1.4 病毒RNA的反转录
            2.2.1.5 病毒DNA提取
            2.2.1.6 普通PCR方法的建立
            2.2.1.7 多重PCR体系条件优化
            2.2.1.8 多重PCR的特异性和敏感性试验
            2.2.1.9 临床验证试验
        2.2.2 五种重要鹅病毒病的流行病学调查
            2.2.2.1 病料采集
            2.2.2.2 引物的设计与合成
            2.2.2.3 病毒DNA提取
            2.2.2.4 病毒RNA的提取及cDNA的制备
            2.2.2.5 病毒PCR扩增
3 结果与分析
    3.1 H9、NDV和TMUV三重RT-PCR检测方法建立结果
        3.1.1 单一PCR扩增结果
        3.1.2 多重PCR条件的优化结果
        3.1.3 多重PCR特异性试验结果
        3.1.4 多重PCR敏感性试验结果
        3.1.5 多重PCR临床应用试验结果
    3.2 五种重要鹅病毒病的流行病学调查结果
        3.2.1 PCR和RT-PCR扩增结果
        3.2.2 不同地区五种鹅病毒病检测统计结果
        3.2.3 五种重要病毒病单一感染和混合感染统计结果
        3.2.4 五种病毒混合感染情况具体统计结果
            3.2.4.1 GPV感染情况统计结果
            3.2.4.2 H9感染情况统计结果
            3.2.4.3 NDV感染情况统计结果
            3.2.4.4 TMUV感染情况统计结果
            3.2.4.5 GoCV感染情况统计结果
        3.2.5 不同季节鹅病毒性疫病检测结果统计
        3.2.6 不同日龄段鹅病毒性疫病检测结果统计
4 讨论
5 结论
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表论文情况

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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5 蒲文s

本文编号：2830621