肌内脂肪对猪肉品质的影响及肌内脂滴的成脂调控

发布时间：2020-10-11 01:38

　　 肌内脂肪含量影响肉质的嫩度、多汁性及风味,如何提高肌内脂滴发育让更多的脂质沉积到肌肉中成为生产者及科研工作者共同关注的话题。近年来,随着多种组学检测技术的快速发展,脂滴的纯化技术越来越受到关注。分离纯化获得具有生物学活性,并且纯度较高的脂滴是保证其生物学功能研究可靠性的前提。本研究分析不同屠宰体重对肉品质的影响,建立猪背最长肌肌内脂滴的超速离心分离纯化的方法,并对分离脂滴进行形态学观察及纯度验证,为研究猪肌内脂肪生成和分子调控机制提供技术支撑。对研究肌肉中脂质的沉积,改善猪肉品质及食用价值,生产有益于人体健康的肉制品具有重要意义。本试验结果如下:1.为了研究不同屠宰体重下肌内脂肪含量对猪胴体性状及肉品质特性的影响,试验选取90±2.0 kg与120±2.0 kg的“杜×长×大”三元杂交肥育猪屠宰后对其肌内脂肪、肉品质及营养成分分析。结果显示:120 kg体重与90 kg体重屠宰时相比,1)随着体重的增加,肌内脂肪含量显著增加;2)随着体重的增加120 kg体重屠宰时极显著的提高了胴体重、背膘厚度、眼肌面积、屠宰率等指标(P0.01)。3)随着屠宰体重的增加极显著提高了猪肉肉色(P0.01),降低了失水率和蒸煮损失,显著提高了肌肉剪切力(P0.05)。4)120 kg体重屠宰时显著提高了不饱和脂肪酸的含量(P0.05)和显著降低了饱和脂肪酸的含量(P0.05)。5)随着体重的增加120kg体重屠宰时显著提高了必需氨基酸的含量(P0.05),极显著的提高了鲜味氨基酸的含量(P0.01)。2.为了建立猪背最长肌肌内脂滴分离纯化的方法,本研究首次尝试分离猪肌内脂滴并进行纯化的方法。将背最长肌组织样品进行不同超速离心速度获得肌内脂滴,经过油红O染色鉴定为形态完整的油滴。提取脂滴蛋白进行考马斯亮蓝染色鉴定脂滴蛋白的纯度较高。然后,通过Western blot技术检测脂滴中是否存在线粒体、高尔基体、内质网、质膜等细胞器,进一步验证脂滴纯度。结果表明:采用超速离心法分离纯化猪背最长肌肌内脂滴,通过形态学观察及Western blot技术验证脂滴纯度,表明这种方法能够分离出纯度较高的肌内脂滴。3.为研究猪肌内脂滴蛋白对脂质沉积及分解代谢的调控机制,本试验以分离纯化脂滴为切入点,观察肌内脂滴的形态大小及数量,将提取脂滴蛋白利用Western blot技术检测调控脂滴代谢的关键因子的表达水平。结果表明:随着育肥猪体重的增加,体重120kg肌内脂滴的体积增大,脂滴内的脂滴代谢相关蛋白极显著增加。综上所述,“杜×长×大”三元杂交育肥猪在体重120 kg左右的屠宰时比体重90 kg肌内脂肪含量显著增加,提高了猪肉肉质性状及营养价值。采用超速离心法分离纯化猪背最长肌肌内脂滴,能够获得形态较好、纯度较高的肌内脂滴。随着育肥猪体重的增加肌内脂滴的体积不断增大,调控脂滴表面脂质沉积及降解的代谢蛋白也增加,共同调控脂滴的代谢平衡。
【学位单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S828
【部分图文】：

离心 30 min。离心后上层漂浮的白色物质即为脂滴（ 1.0 mL 用于脂滴蛋白纯度的检测（PNS2）。然后在 4℃，90,清液（PNS3）（图 4-1 D）。将上层脂滴移入另一个无菌的 4离心管中加入 BufferB，并用移液枪小心吹打聚集成团的脂这样有利于除去脂滴间夹杂的其他细胞器或胞膜等（图 4-1C离心 30 min，取 上清液（PNS4）（图 4-1E）。得到更加纯化的脂滴，小心收集上一步骤多次离心的脂滴2PA 离心管中，并且将脂滴在溶液中小心吹打成乳白色。4℃，注意：离心的转速过高会导致脂滴破碎，速度过低则得不到清液（PNS5）并收集上层漂浮的脂滴，尽量避免抽取下层的 的离心管中（图 4-1F）。此时，如果脂滴用于观察形态置于-4 Western blots 及组学分析则放入-80℃冰箱内保存，防止蛋白

图 4-2 猪肌内脂滴、油红 O 染色、BODIPY 染色图图 A 为肌内脂滴形态图（40×）；图 B（10×）和 C（40×）油红 O 染色图；图 D （10×）BODIPY荧光染色脂滴形态图Figure.4-2 Lipid droplets and oil red O staining and bodipy fluorescence staining profiles ofintramuscular fat in pigsFigure. A Intramuscular lipid droplet profiles (40×); Figure B (10×) and figure C (40×) Oil red Ostaining and figure D bodipy fluorescence staining lipid droplets profiles of intramuscular fat4.4 考马斯亮蓝染色蛋白的鉴定将不同离心力获得的细胞浆（Cyto）、上清液（PNS1-5）及脂滴（LDs）蛋白由SDS-PAGE 分离蛋白后进行考马斯亮蓝染色。图 4-3 结果显示：经过多次超速离心后获得的脂滴蛋白不同于 Cyto 及 PNS 蛋白组成，但是第三次离心获得的 PNS3 蛋白表达谱开始与 LDs 蛋白相似。LDs 蛋白中包含 5 种主要的蛋白条带，Image J 分析主要脂滴相关蛋白量近 54.24%。LDs 经过 5 次反复清洗、离心，最终获得的 LDs 蛋白轮廓与 PNS4

荧光染色脂滴形态图-2 Lipid droplets and oil red O staining and bodipy fluorescence staintramuscular fat in pigsntramuscular lipid droplet profiles (40×); Figure B (10×) and figured figure D bodipy fluorescence staining lipid droplets profiles of intra蓝染色蛋白的鉴定力获得的细胞浆（Cyto）、上清液（PNS1-5）及脂滴蛋白后进行考马斯亮蓝染色。图 4-3 结果显示：经过多同于 Cyto 及 PNS 蛋白组成，但是第三次离心获得的 相似。LDs 蛋白中包含 5 种主要的蛋白条带，Image 24%。LDs 经过 5 次反复清洗、离心，最终获得的 LDs 轮廓相似，与 Ding（2012）研究结果一致。所以，本已经适合进一步的蛋白质组学分析。
【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 张海燕;姜学;尹靖东;;猪肌内脂肪沉积的营养调控及候选基因的研究进展[J];中国畜牧杂志;2009年21期

2 张曦;赵素梅;葛长荣;赖桦;李长强;高士争;;日粮组成和能量水平对乌金猪肉品质的影响(英文)[J];动物营养学报;2008年04期

3 郭建凤;武英;;不同体重商品猪生长性能及胴体肉品质研究[J];安徽农业科学;2007年22期

4 王建辉;贺建华;易宣;李艳;赵玉蓉;;杜仲提取物对猪胴体品质及肌肉氨基酸含量的影响[J];动物营养学报;2007年03期

5 李长强;闫益波;高士争;;猪的肌内脂肪生成及其调控[J];饲料工业;2007年07期

6 杨海玲;曾勇庆;魏述东;武英;刘婵娟;;莱芜猪肌肉脂肪酸组成的发育性变化及其对肉质特性的影响[J];中国畜牧杂志;2006年05期

7 REN BARTZ,JOHNK ZEHMER;对脂肪滴的新认识(英文)[J];生物化学与生物物理进展;2005年05期

8 李庆岗,经荣斌;猪肌内脂肪酸的研究进展[J];饲料博览;2004年03期

9 张伟力,徐继成,王胜,叶道武;不同屠宰体重美系杜洛克母猪胴体肉质性能初报[J];养猪;2003年06期

10 魏彩虹;甘肃黑猪合成系肌肉脂肪酸和氨基酸特征研究[J];甘肃畜牧兽医;2001年05期

相关博士学位论文 前2条

1 田万年;延边黄牛背最长肌差异表达基因的克隆鉴定及特征分析[D];延边大学;2011年

2 姚焰础;苏尼特羔羊肌内脂肪细胞分化相关因子和肌内脂肪代谢关键酶基因表达发育规律的研究[D];内蒙古农业大学;2008年

本文编号：2835857