试验选取46日龄正常体重爱拔益加(AA)肉鸡(简称AA肉鸡,平均体重:1.86kg)32只和46日龄肉用丝羽乌骨鸡(简称乌鸡,平均体重:0.75kg)36只,随机分配到6个处理组:AA肉鸡对照组(注射PBS,n=10)、AA肉鸡低剂量胰岛素处理组(80μg/kg体重,n=10)、AA肉鸡高剂量胰岛素处理组(100μg/kg体重,n=6)、乌鸡对照组(注射PBS,n=12)、乌鸡低剂量胰岛素处理组(80μg/kg体重,n=12)和乌鸡高剂量胰岛素处理组(100μg/kg体重,n=12)。为了研究体重效应对家禽血糖含量、血清生化指标以及基因表达的影响,另选取低体重AA肉鸡(平均体重:0.88kg),注射低剂量胰岛素(80μg/kg体重,n=6)命名为低体重组。在46日龄时进行饥饿处理12h,47日龄进行胰岛素耐受性试验。试验分为以下两个部分:试验一不同胰岛素剂量对AA肉鸡和乌鸡血糖含量和血清生化指标的影响为了研究:(1)AA肉鸡和乌鸡胰腺指数对血糖含量的影响,(2)不同胰岛素剂量对AA肉鸡和乌鸡的血糖的影响,(3)不同胰岛素剂量对AA肉鸡和乌鸡的血清生化指标的影响。试验结果如下:(1)胰腺指数:AA肉鸡低体重组胰腺指数显著高于正常体重组。乌鸡胰腺指数极显著高于AA肉鸡正常体重组。AA肉鸡低体重组胰腺指数与乌鸡差异不显著。(2)血糖含量:进行胰岛素耐受性试验,注射胰岛素后AA肉鸡和乌鸡血糖呈直线下降。0min~120min血糖在AA肉鸡和乌鸡之间差异不显著,120min时对AA肉鸡和乌鸡恢复饲喂,AA肉鸡血糖含量基本维持不变,乌鸡血糖含量升高幅度较大,240min时乌鸡血糖含量极显著高于AA肉鸡(P0.01),约是AA肉鸡的2.56倍。体重差异对胰岛素调节鸡血糖含量的效应:在自然状态下,高体重组血糖含量显著(P0.05)高于低体重组,低剂量胰岛素注射后不同体重AA肉鸡血糖含量差异不显著。在选取的同等体重级别的AA肉鸡和乌鸡中,在自然状态下,乌鸡正常体重组血糖含量极显著(P0.01)高于AA肉鸡低体重组,低剂量胰岛素注射后低体重组AA肉鸡与乌鸡血糖含量差异不显著。(3)血清生化指标:胰岛素注射240min后,胰岛素高剂量处理组乌鸡血清尿素含量显著(P0.05)高于AA肉鸡,约是AA肉鸡的3.57倍。胰岛素高剂量组AA肉鸡血清胰岛素含量显著(P0.05)高于胰岛素低剂量组AA肉鸡,约是胰岛素低剂量组2.94倍。低剂量胰岛素处理后,血清中尿素含量在120min和240min时乌鸡组极显著(P0.01)高于AA肉鸡组,约是AA肉鸡组3.54和2.65倍。在240min时,乌鸡血清中尿素含量显著(P0.05)高于AA肉鸡。低剂量胰岛素处理后,在240min时乌鸡血清中尿酸含量显著(P0.05)高于0min时,约是0min的2.09倍。在120min时,乌鸡血清中总胆固醇含量极显著(P0.01)高于AA肉鸡。低剂量胰岛素处理后,在乌鸡中,仅120min时血清中总胆固醇含量极显著(P0.01)高于240min。(4)体重差异对血清生化指标的影响:低剂量胰岛素注射后240min,低体重组AA肉鸡血清中葡萄糖含量显著(P0.05)高于高体重组。同样在胰岛素注射后240min,乌鸡中血清中尿素含量极显著(P0.01)高于AA肉鸡低体重组,约是AA肉鸡低体重组的2.93倍,乌鸡血清中尿酸含量显著(P0.05)高于AA肉鸡低体重组。试验二不同胰岛素剂量对AA肉鸡和乌鸡基因表达效应的影响为了研究胰岛素剂量对AA肉鸡和乌鸡基因相对表达量的影响,试验采集47日龄0min、120min和240minAA肉鸡和乌鸡肝脏、下丘脑、胸肌和胰腺。根据相关家禽胰岛素抵抗的基因(GLUT2、GLUT12、NPY和胰岛素受体(Insulin receptor,IR))以及相关序列设计引物,采用荧光定量FQ-PCR对候选基因及相关序列进行定量分析。试验结果如下:(1)在AA肉鸡下丘脑中低剂量组GLUT2相对表达量显著(P0.05)高于高剂量组,约是高剂量组的11.51倍,低剂量组AA肉鸡GLUT2相对表达量显著(P0.05)高于乌鸡,约是乌鸡的11.68倍。在乌鸡下丘脑中低剂量组NPY相对表达量显著(P0.05)高于高剂量组,约是高剂量组的3.78倍。AA肉鸡下丘脑GLUT2 240min时相对表达量极显著(P0.01)高于120min时、显著(P0.05)高于0min时,约是120min的7.48倍、0min的3.06倍。240min时,AA肉鸡下丘脑GLUT2相对表达量极显著高于乌鸡,约是乌鸡的11.67倍。(2)低剂量胰岛素处理后,体重差异对AA肉鸡和乌鸡基因表达效应的影响发现,在胰岛素注射后240min的AA肉鸡中,在下丘脑中高体重组GLUT2相对表达量显著(P0.05)高于低体重组,约是低体重组的8.28倍,而IR的相对表达量则是低体重组显著(P0.05)高于高体重组,约是高体重组的2.13倍。低剂量胰岛素处理后,低体重组胸肌IR相对表达量显著(P0.05)高于高体重组,约是高体重组的2.56倍。
【学位单位】：河南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S831
【部分图文】：
图 3-2 胰岛素标准曲线图Fig.3-2 Insulin standard curve和测得 OD 值如表 3-4，计算标准曲线回归方程，使用 E参数）拟合模型。标准曲线如图 3-2，曲线方程：方程: y ==1.26082、C=36.36894、D=0.96749），r^2=0.998的测定以及胰腺指数的计算日龄，测定活重并屠宰全部试验组 AA 肉鸡和乌鸡，解剖重（g）/活重（kg）析AS9.2 软件中 ANOVA(GLM)过程进行单变量单因素、单验。结果以平均值±标准误（mean±SE）表示，以 P<0.05 为重、胰腺重以及胰腺指数的差异分析
A 质量检测中提取的总 RNA 以微量紫外分光光度计检测 RNA 的纯度均到目标，随机抽样经 1%电泳鉴定，由图 4-1 可以看出三个条 RNA 的 1%琼脂糖凝胶电泳图（图中的三条带从上往下依次为 28s、18A with 1 % agarose gel electrophoresis (the three bands from top to bottom is cDNA 质量
的结果以 Excel 表格的形式导出，以便进行下一步由加样等操作过程引起的误差。β-actin 为内标基因，每个样本的目的基因和内参基用 2-△△Ct法进行数据分析，相对定量数据处理的计-平均△Ct（每个基因△Ct 平均值最低组平均值）=因-内参基因）]（对照组）。平均相对表达量=2-△9.2 软件中 ANOVA(GLM)过程进行单变量单因素。结果以平均值±标准误（mean±SE）表示，以 P<0.0检测取的总 RNA 以微量紫外分光光度计检测 RNA 的纯，随机抽样经 1%电泳鉴定，由图 4-1 可以看出三
【参考文献】
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本文编号：
2840643
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