猫多能性基因慢病毒表达载体的构建与鉴定
发布时间：2021-01-14 07:55
本试验采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）获取猫Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc目的基因，根据NCBI公布的猫Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc基因序列设计合成了上、下游引物，并导入相应的酶切位点及保护碱基，Oct4基因上下游引物分别加上NotI和BamHI酶切位点，Sox2、Klf4和c-Myc基因上下游引物分别加上NotI和NsiI酶切位点。将扩增的基因片段连接T载体pUC57。酶切载体LV5和含目的基因的表达质粒，将目的基因与携带绿色荧光蛋白（GFP）的慢病毒载体LV5进行定向连接，构建慢病毒表达载体LV-Oct4、LV-Sox2、LV-Klf4和LV-c-Myc。将其连接产物分别转化至细菌感受态细胞中，经筛选阳性克隆、酶切鉴定后送测序，并通过lipofectamine2000介导将重组质粒LV-Oct4、LV-Sox2、LV-Klf4和LV-c-Myc转染293T包装细胞对慢病毒进行包装转染并收集病毒上清测定病毒滴度，取得以下实验结果：（1）本试验成功克隆出猫Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc基因。采用逆转录聚合酶链反应的方法分别扩增出片段大小为1083b...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图14个目的基因PCR扩增1.Oct4;2.Sox2;3.Klf4;4.c-Myc；5.marker;Fig.1targetgenesamplicationbyPCR
4 个目的基因 PCR 鉴定（与 T 载体连接）1. Oct4;2. Sox2;3. Klf4;4. c-Myc；5.Fig. 2 PCR identification of four target genes （connected to T vector）接 T 载体的双酶切鉴定接到 T 载体后对其进行转化，挑菌，摇菌，质粒抽提，抽提的质粒进行双酶因用 NotI 和 BamHI 内切酶酶切，Sox2、Klf4 和 c-Myc 基因分别用 NotI 和切，结果 1%琼脂糖凝胶电泳后得到的目的基因片段与载体大小均与预期的片图 3）。
个目的基因 PCR 鉴定（与 T 载体连接）1. Oct4;2. Sox2;3. Klf4;4. c-Myc；Fig. 2 PCR identification of four target genes （connected to T vector）接 T 载体的双酶切鉴定到 T 载体后对其进行转化，挑菌，摇菌，质粒抽提，抽提的质粒进行双酶因用 NotI 和 BamHI 内切酶酶切，Sox2、Klf4 和 c-Myc 基因分别用 NotI 和切，结果 1%琼脂糖凝胶电泳后得到的目的基因片段与载体大小均与预期的 3）。
本文编号：2976526
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图14个目的基因PCR扩增1.Oct4;2.Sox2;3.Klf4;4.c-Myc；5.marker;Fig.1targetgenesamplicationbyPCR
4 个目的基因 PCR 鉴定（与 T 载体连接）1. Oct4;2. Sox2;3. Klf4;4. c-Myc；5.Fig. 2 PCR identification of four target genes （connected to T vector）接 T 载体的双酶切鉴定接到 T 载体后对其进行转化，挑菌，摇菌，质粒抽提，抽提的质粒进行双酶因用 NotI 和 BamHI 内切酶酶切，Sox2、Klf4 和 c-Myc 基因分别用 NotI 和切，结果 1%琼脂糖凝胶电泳后得到的目的基因片段与载体大小均与预期的片图 3）。
个目的基因 PCR 鉴定（与 T 载体连接）1. Oct4;2. Sox2;3. Klf4;4. c-Myc；Fig. 2 PCR identification of four target genes （connected to T vector）接 T 载体的双酶切鉴定到 T 载体后对其进行转化，挑菌，摇菌，质粒抽提，抽提的质粒进行双酶因用 NotI 和 BamHI 内切酶酶切，Sox2、Klf4 和 c-Myc 基因分别用 NotI 和切，结果 1%琼脂糖凝胶电泳后得到的目的基因片段与载体大小均与预期的 3）。
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