家兔出血症病毒病毒样颗粒疫苗的研制及评价
发布时间：2021-01-14 10:00
为研究重组杆状病毒RHDV-VP60株表达VP60蛋白及其效果的情况,将RHDV-VP60株接种Sf9细胞制备家兔出血症病毒样颗粒蛋白,与铝胶佐剂混合制成灭活疫苗,进行安全检验、最小免疫剂量测定及免疫持续期研究。结果显示,3批VP60蛋白病毒样颗粒抗原液的血凝效价为1∶218～1∶219。3批疫苗以超剂量（每只2.0 mL）免疫家兔未见任何不良反应;对兔的最小免疫剂量为每只0.5 mL;免疫后第14天,血清RHDV HI效价为1∶16～1∶64,攻毒后5/5健活;疫苗免疫持续期达210 d。上述研究结果表明,重组杆状病毒RHDV-VP60株可高效表达VP60蛋白并能形成病毒样颗粒,用其制备的疫苗安全性及免疫效果良好,解决了传统疫苗生产过程所存在的生物安全风险以及重组蛋白表达量低的问题。
【文章来源】：中国兽医科学. 2020,50(08)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
重组杆状病毒RHDV-VP60株VP60基因PCR鉴定Figure1Polymerasechainreactionoftherecombinantba-250bp100bp
中国兽医科学第50卷图2重组杆状病毒RHDV-VP60株表达VP60蛋白SDS-PAGE检测Figure2PolyacrylamidegelelectrophoresisoftheVP60proteinexpressedbytherecombinantbaculovirusRHDV-VP60strainM：蛋白marker；1：Sf9细胞对照；2：重组杆状病毒RHDV-VP60株。M：Proteinmolecularweightmarker；1：Sf9cellscontrol；2：Recombi-nantbaculovirusRHDV-VP60strain.图1重组杆状病毒RHDV-VP60株VP60基因PCR鉴定Figure1Polymerasechainreactionoftherecombinantba-culovirusRHDV-VP60strainVP60geneM：DNA分子质量标准；1：阴性对照；2：重组杆状病毒RHDV-VP60株。M：DL5000DNAMarker；1：Negativecontrol；2：Recombinantbaculovi-rusRHDV-VP60strain.12M5000bp3000bp2000bp1500bp1000bp750bp500bp250bp100bp12M250ku130ku100ku70ku55ku35ku25ku15ku图3间接免疫荧光（IFA）检测结果（200×）Figure3IndirectimmunofluorescencedetectionresultA：重组杆状病毒RHDV-VP60株感染的Sf9细胞；B：空白对照Sf9细胞；C：阴性血清对照。A：Sf9cellsinfectedwithrecombinantbaculovirusRHDV-VP60strainincubatedwithRHDVpositiveserum；B：Sf9cellscontrol；C：Sf9cellsinfectedwithrecombinantbaculovirusRHDV-VP60strainincubatedwithRHDVnegativeserum.2.4安全检验3批疫苗分别经颈背部皮下超剂量接种1.5～3.0kg的健康易感家兔4只，每只2.0mL。接种后观察7d，精神、采食、饮水、粪便、体温等无异常，剖检后观察注射部位均无结节形成，疫苗吸收良好。2.5疫苗的最小免疫剂量测定3批疫苗接种后第14天，对照兔血清RHDVHI效价均＜1∶4，每只0.25mL免疫组HI效价为1∶8～1∶16，每只0.5mL免疫组HI效价
oteinmolecularweightmarker；1：Sf9cellscontrol；2：Recombi-nantbaculovirusRHDV-VP60strain.图1重组杆状病毒RHDV-VP60株VP60基因PCR鉴定Figure1Polymerasechainreactionoftherecombinantba-culovirusRHDV-VP60strainVP60geneM：DNA分子质量标准；1：阴性对照；2：重组杆状病毒RHDV-VP60株。M：DL5000DNAMarker；1：Negativecontrol；2：Recombinantbaculovi-rusRHDV-VP60strain.12M5000bp3000bp2000bp1500bp1000bp750bp500bp250bp100bp12M250ku130ku100ku70ku55ku35ku25ku15ku图3间接免疫荧光（IFA）检测结果（200×）Figure3IndirectimmunofluorescencedetectionresultA：重组杆状病毒RHDV-VP60株感染的Sf9细胞；B：空白对照Sf9细胞；C：阴性血清对照。A：Sf9cellsinfectedwithrecombinantbaculovirusRHDV-VP60strainincubatedwithRHDVpositiveserum；B：Sf9cellscontrol；C：Sf9cellsinfectedwithrecombinantbaculovirusRHDV-VP60strainincubatedwithRHDVnegativeserum.2.4安全检验3批疫苗分别经颈背部皮下超剂量接种1.5～3.0kg的健康易感家兔4只，每只2.0mL。接种后观察7d，精神、采食、饮水、粪便、体温等无异常，剖检后观察注射部位均无结节形成，疫苗吸收良好。2.5疫苗的最小免疫剂量测定3批疫苗接种后第14天，对照兔血清RHDVHI效价均＜1∶4，每只0.25mL免疫组HI效价为1∶8～1∶16，每只0.5mL免疫组HI效价为1∶16～1∶64，每只1.0mL剂量组HI效价为1∶16～1∶128（见图5）。同时，接种后第14天攻毒，未免疫对照组5/5死亡，每只0.25mL免疫组3/5～4/5保护，每只0.5mL和每只1.0mL免疫组均5/5保护（见表1）。2.6免疫持续期三批疫苗以每只1.0mL的剂量免
【参考文献】：
期刊论文
[1]兔出血症病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及对家兔的免疫保护效果[J]. 王芳,胡波,任雪枫,范志宇,杨龙圣,徐为中,张则斌,何孔旺. 畜牧兽医学报. 2008(10)
[2]最新动物病毒分类简介[J]. 陆承平. 中国病毒学. 2005(06)
[3]在昆虫细胞中表达能自聚成病毒样颗粒的兔出血症病毒衣壳蛋白[J]. 严维巍,崔治中,王永坤. 病毒学报. 2004(04)
[4]原核表达的兔出血症病毒衣壳蛋白对兔的免疫保护效果[J]. 王永山,陆承平,周宗安,薛家宾. 中国农业科学. 2004(11)
[5]家兔一种新的病毒病——兔瘟的研究[J]. 王永坤,吉传义,周阳生,孙怀昌,田慧芳,许益民,王宝安,霍金富,李俊宝,高锦梁,邵天浩,于红丽. 中国农业科学. 1988(05)
本文编号：2976697
【文章来源】：中国兽医科学. 2020,50(08)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
重组杆状病毒RHDV-VP60株VP60基因PCR鉴定Figure1Polymerasechainreactionoftherecombinantba-250bp100bp
中国兽医科学第50卷图2重组杆状病毒RHDV-VP60株表达VP60蛋白SDS-PAGE检测Figure2PolyacrylamidegelelectrophoresisoftheVP60proteinexpressedbytherecombinantbaculovirusRHDV-VP60strainM：蛋白marker；1：Sf9细胞对照；2：重组杆状病毒RHDV-VP60株。M：Proteinmolecularweightmarker；1：Sf9cellscontrol；2：Recombi-nantbaculovirusRHDV-VP60strain.图1重组杆状病毒RHDV-VP60株VP60基因PCR鉴定Figure1Polymerasechainreactionoftherecombinantba-culovirusRHDV-VP60strainVP60geneM：DNA分子质量标准；1：阴性对照；2：重组杆状病毒RHDV-VP60株。M：DL5000DNAMarker；1：Negativecontrol；2：Recombinantbaculovi-rusRHDV-VP60strain.12M5000bp3000bp2000bp1500bp1000bp750bp500bp250bp100bp12M250ku130ku100ku70ku55ku35ku25ku15ku图3间接免疫荧光（IFA）检测结果（200×）Figure3IndirectimmunofluorescencedetectionresultA：重组杆状病毒RHDV-VP60株感染的Sf9细胞；B：空白对照Sf9细胞；C：阴性血清对照。A：Sf9cellsinfectedwithrecombinantbaculovirusRHDV-VP60strainincubatedwithRHDVpositiveserum；B：Sf9cellscontrol；C：Sf9cellsinfectedwithrecombinantbaculovirusRHDV-VP60strainincubatedwithRHDVnegativeserum.2.4安全检验3批疫苗分别经颈背部皮下超剂量接种1.5～3.0kg的健康易感家兔4只，每只2.0mL。接种后观察7d，精神、采食、饮水、粪便、体温等无异常，剖检后观察注射部位均无结节形成，疫苗吸收良好。2.5疫苗的最小免疫剂量测定3批疫苗接种后第14天，对照兔血清RHDVHI效价均＜1∶4，每只0.25mL免疫组HI效价为1∶8～1∶16，每只0.5mL免疫组HI效价
oteinmolecularweightmarker；1：Sf9cellscontrol；2：Recombi-nantbaculovirusRHDV-VP60strain.图1重组杆状病毒RHDV-VP60株VP60基因PCR鉴定Figure1Polymerasechainreactionoftherecombinantba-culovirusRHDV-VP60strainVP60geneM：DNA分子质量标准；1：阴性对照；2：重组杆状病毒RHDV-VP60株。M：DL5000DNAMarker；1：Negativecontrol；2：Recombinantbaculovi-rusRHDV-VP60strain.12M5000bp3000bp2000bp1500bp1000bp750bp500bp250bp100bp12M250ku130ku100ku70ku55ku35ku25ku15ku图3间接免疫荧光（IFA）检测结果（200×）Figure3IndirectimmunofluorescencedetectionresultA：重组杆状病毒RHDV-VP60株感染的Sf9细胞；B：空白对照Sf9细胞；C：阴性血清对照。A：Sf9cellsinfectedwithrecombinantbaculovirusRHDV-VP60strainincubatedwithRHDVpositiveserum；B：Sf9cellscontrol；C：Sf9cellsinfectedwithrecombinantbaculovirusRHDV-VP60strainincubatedwithRHDVnegativeserum.2.4安全检验3批疫苗分别经颈背部皮下超剂量接种1.5～3.0kg的健康易感家兔4只，每只2.0mL。接种后观察7d，精神、采食、饮水、粪便、体温等无异常，剖检后观察注射部位均无结节形成，疫苗吸收良好。2.5疫苗的最小免疫剂量测定3批疫苗接种后第14天，对照兔血清RHDVHI效价均＜1∶4，每只0.25mL免疫组HI效价为1∶8～1∶16，每只0.5mL免疫组HI效价为1∶16～1∶64，每只1.0mL剂量组HI效价为1∶16～1∶128（见图5）。同时，接种后第14天攻毒，未免疫对照组5/5死亡，每只0.25mL免疫组3/5～4/5保护，每只0.5mL和每只1.0mL免疫组均5/5保护（见表1）。2.6免疫持续期三批疫苗以每只1.0mL的剂量免
【参考文献】：
期刊论文
[1]兔出血症病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及对家兔的免疫保护效果[J]. 王芳,胡波,任雪枫,范志宇,杨龙圣,徐为中,张则斌,何孔旺. 畜牧兽医学报. 2008(10)
[2]最新动物病毒分类简介[J]. 陆承平. 中国病毒学. 2005(06)
[3]在昆虫细胞中表达能自聚成病毒样颗粒的兔出血症病毒衣壳蛋白[J]. 严维巍,崔治中,王永坤. 病毒学报. 2004(04)
[4]原核表达的兔出血症病毒衣壳蛋白对兔的免疫保护效果[J]. 王永山,陆承平,周宗安,薛家宾. 中国农业科学. 2004(11)
[5]家兔一种新的病毒病——兔瘟的研究[J]. 王永坤,吉传义,周阳生,孙怀昌,田慧芳,许益民,王宝安,霍金富,李俊宝,高锦梁,邵天浩,于红丽. 中国农业科学. 1988(05)
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