猪源OAS抗日本脑炎病毒感染的活性研究

发布时间：2021-01-14 15:42

　　日本脑炎（Japanese encephalitis, JE）又称流行性乙脑脑炎,简称乙脑,是由日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）感染所引发的一种人畜共患病。JEV属于黄病毒科黄病毒属,在自然条件下主要通过蚊虫传播。猪被认为是JEV最重要的自然增殖动物,在乙脑的传播中起到重要作用。猪乙型脑炎病毒存在于东南亚地区并在大多数猪场流行,严重威胁人畜健康。2’-5’寡腺苷合成酶（2’-5’ oligoadenylate synthetases,OAS）是干扰素（Interferon，IFN）诱导产生的抗病毒蛋白,是哺乳动物先天性免疫系统的重要成分。细胞内的OAS/RNaseL信号通路在宿主控制黄病毒、呼肠孤病毒和脑心肌炎病毒的先天性免疫反应中起重要作用。近年来已有研究证实OAS存在不依赖于RNase L途径的抗病毒作用。自发现小鼠mOAS1b基因为WNV的风险标志基因以来,已报道OAS具有抑制脑心肌炎病毒（EMCV）、水疱性口炎病毒（VSV）等多种病毒增殖的作用。人的OAS基因已被证实与西尼罗病毒（WNV）、丙型肝炎病毒（HCV）和SARS冠状病毒... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：103 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一篇 文献综述
    第一章 2'-5'-寡腺苷酸合成酶的研究进展
        1 2'-5'-寡腺苷酸合成酶的生物学特征
            1.1 2'-5'-寡腺苷酸合成酶家族基因组成
            1.2 2'-5'-寡腺苷酸合成酶蛋白质结构
        2 2'-5'-寡腺苷酸合成酶的活化机制
        3 2'-5'-寡腺苷酸合成酶家族的起源
        4 2'-5'寡腺苷酸合成酶家族抗病毒的分子机制研究进展
            4.1 依赖于OAS/RNase L途径的抗病毒作用
            4.2 不依赖于RNase L途径的抗病毒作用
        5 2'-5'寡腺苷酸系统的生物学功能
        6 2'-5'寡腺苷酸合成酶家族的单核苷酸多态性分析
    第二章 日本脑炎病毒及其疫苗的研究进展
        1 日本脑炎病毒流行病学特征
            1.1 生态学和流行病学
            1.2 遗传和抗原多样性
            1.3 传播特征
            1.4 临诊症状
        2 日本脑炎病毒的分子生物学特性
            2.1 基因组结构特征
            2.2 蛋白结构特征及功能
            2.3 乙型脑炎病毒的复制过程
        3 日本脑炎病毒疫苗的研究进展
            3.1 鼠脑纯化灭活疫苗
            3.2 细胞培养减毒活疫苗
            3.3 细胞培养灭活疫苗
            3.4 基因工程嵌合减毒活疫苗
            3.5 痘病毒载体重组疫苗
            3.6 DNA疫苗
        4 日本脑炎病毒的诊断方法
            4.1 临床综合诊断
            4.2 病毒分离与鉴定
            4.3 血清学诊断
            4.4 分子生物学检测技术
    参考文献
第二篇 实验部分
    第三章 猪源OAS2基因的表达及抗血清的制备
        摘要
        1 实验材料
            1.1 细胞株
            1.2 菌种、质粒
            1.3 实验动物
            1.4 主要试剂
            1.5 主要仪器
            1.6 引物设计与合成
            1.7 主要溶液的配制
        2 实验方法
            2.1 猪源OAS2基因的扩增
            2.2 猪源OAS2原核表达载体的构建
            2.3 重组猪源OAS2蛋白的表达
            2.4 猪源OAS2多克隆抗体的制备
            2.5 猪源OAS2多克隆抗体的鉴定
        3 实验结果
            3.1 猪源OAS2基因的PCR扩增
            3.2 重组猪源OAS2原核表达质粒的鉴定
            3.3 重组质粒pET-OAS2的表达及鉴定
            3.4 pOAS2抗血清的鉴定
        4 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
    第四章 猪源OAS基因家族抗JEV感染的初步研究
        摘要
        1 实验材料
            1.1 细胞和毒株
            1.2 质粒载体
            1.3 主要试剂
            1.4 主要仪器
            1.5 引物设计与合成
        2 实验方法
            2.1 猪源OAS基因家族真核表达载体的构建
            2.2 去内毒素小提pFlag-pOAS1b和pcDNA-pOAS2质粒
            2.3 噬斑形成试验测JEV滴度
            2.4 Real-Time PCR检测PK-15细胞内OAS基因家族的表达量
            2.5 Real-Time PCR检测PK-15细胞中JEV滴度变化量
            2.6 猪源OAS基因家族对JEV增殖影响的间接免疫荧光试验
            2.7 Western Blot试验检测猪源OAS基因家族对JEV增殖的影响
            2.8 Western Blot试验检测PK-15细胞转染OAS2 siRNA后OAS2蛋白表达量的变化
            2.9 PK-15细胞RNAi OAS2对JEV增殖的影响
        3 实验结果
            3.1 猪源OAS基因家族真核表达载体的构建
                3.1.1 重组PFlag-pOASlb真核表达载体的鉴定
                3.1.2 重组pcDNA-pOAS2真核表达载体的鉴定
            3.2 猪干扰素对JEV增殖的抑制作用
            3.3 猪干扰素诱导猪源OAS基因家族的表达
            3.4 猪干扰素和JEV强毒株共同作用PK细胞OAS表达量变化特征
            3.5 PK-15细胞过表达pOAS蛋白对JEV增殖的影响
        4 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
    第五章 猪源OAS1编码区SNP特征
        摘要
        1 实验材料
            1.1 组织样品
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器
            1.4 溶液的配置
            1.5 引物设计与合成
        2 实验方法
            2.1 猪基因组DNA的提取
            2.2 猪OAS1编码区外显子的获得
            2.3 PCR产物的回收纯化
            2.4 试验数据的统计和处理
        3 实验结果
            3.1 PCR扩增结果
            3.2 pOAS1a和pOAS1b基因外显子1-6的比较分析
            3.3 pOAS1a基因编码区外显子的SNP检测
            3.4 pOAS1b基因编码区外显子的SNP检测
            3.5 健康猪及乙脑发病猪OAS1编码区SNP特征
        4 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
全文总结
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
[1]乙型脑炎病毒NS1蛋白的新型prime-boost免疫策略研究[D]. 吴鹏.南京农业大学 2009



本文编号：2977113