绵羊卵泡发育中AMH、FSHR、LHR基因的表达特征分析
发布时间：2021-01-16 17:17
本实验以探索抗苗勒管激素（anti-Mullerian hormone, AMH），卵泡刺激素受体（follicle-stimulatinghormone receptor，FSHR）、黄体生成素受体（luteinizing hormone receptor，LHR）与卵泡发育相关基因在成年羊及羔羊卵巢中的定位及表达特征，以了解这些基因在绵羊卵泡发育的作用。本文通过分子克隆，RT-PCR定量分析及免疫组织化学等方法，对比分析AMH、FSHR和LHR在羔羊和成年羊卵巢卵泡中的表达模式，探讨这些基因在绵羊卵泡发育中的调控机制。实验分为以下四部分：1绵羊AMH基因的克隆、序列分析与原核表达以绵羊卵泡颗粒细胞为材料，提取总RNA，运用同源序列克隆技术，对绵羊AMH基因的cDNA全长进行克隆及序列分析。根据预测AMH蛋白序列将其氨基末端编码260个氨基酸序列亚克隆至pET15b构建原核表达载体，经IPTG诱导重组表达及鉴定。结果表明：获得绵羊AMH基因cDNA全长1797bp（Genbank No. KC986978），开放阅读框为1728bp，预测编码575个氨基酸，N端24个氨基酸为信号肽序...
【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
绵羊AMH的RT-PCR产物凝胶电泳图
绵羊卵泡发育中 AMH、FSHR、LHR 基因的表达特征分析绵羊 AMH 前体蛋白与牛，猪，人和小鼠的同源性分别为 95.80%，77.60 %，75.90 %，66.60 %，而与斑马鱼的同源性仅为 18%（图 1-4）。在各物种的 AMH 氨基酸序列中 N末端序列变异很大，而 C 末端氨基酸高度保守，其中 7 个半胱氨酸严格保守（图 1-3）。
图 1-3 绵羊、牛、猪、人、鼠、袋鼠、鳄鱼、鸡和斑马鱼 AMH 氨基酸序列的比对分析Fig. 1-3 Alignment of the deduced amino acid sequences ofAMH in ovine, cattle, pig, human, mouswallaby, alligator, chichen, and zebrafish：其中 N 末端的信号肽和 C 末端的序列均有箭头标识。潜在的活性激活位点均由文本框标识。TGFβ区域由阴，7 个保守的半胱氨酸加框显示。氨基酸的相似性由星点标识（：=高度相似，.=低度相似，*=完全一致）。te: The signal peptide sequence and the beginning of the N- and C-terminal domain for AMH in ovine are shownows. The peptide cleavage site in human as well as potential cleavage sites for AMH in other species are boxed and de TGF-β domain is grey-shaded and the 7 conserved cysteines of this domain are boxed. Identical and similar amino marked by asterisk and dots (: = strong score, . = weak score according to comparison matrix Gonnet Pampectively).
【参考文献】：
期刊论文
[1]快速石蜡切片法在免疫组化染色中的应用[J]. 张伟,周永梅,陈明城,王蔚. 中国组织化学与细胞化学杂志. 2011(04)
[2]超数排卵效果不同绵羊卵巢卵泡促卵泡素受体的分布[J]. 倪和民,张鸿波,刘云海,芦天罡,邓桂馨,郭勇. 中国农业科学. 2011(06)
[3]诱导幼羔卵泡发育及体外胚胎生产[J]. 陈晓勇,田树军,桑润滋,孙树春,赵驻军,李俊杰,敦伟涛. 农业生物技术学报. 2008(03)
[4]哺乳动物卵泡闭锁的研究[J]. 丁爱军,苏雷. 中国畜禽种业. 2007(06)
[5]关于石蜡切片在染色中脱蜡的探讨[J]. 荣玮,刘海燕. 解剖学杂志. 2006(01)
[6]颗粒细胞的增殖分化及其在卵泡发育中的作用[J]. 卢翠玲,杨巍,胡召元,刘以训. 科学通报. 2005(21)
[7]卵泡生长、分化和闭锁的调控[J]. 金萱,刘以训. 科学通报. 2003(14)
[8]煮沸法在石蜡切片抗原修复中应用的探讨[J]. 任学军,江昌新. 天津医科大学学报. 2001(01)
本文编号：2981215
【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
绵羊AMH的RT-PCR产物凝胶电泳图
绵羊卵泡发育中 AMH、FSHR、LHR 基因的表达特征分析绵羊 AMH 前体蛋白与牛，猪，人和小鼠的同源性分别为 95.80%，77.60 %，75.90 %，66.60 %，而与斑马鱼的同源性仅为 18%（图 1-4）。在各物种的 AMH 氨基酸序列中 N末端序列变异很大，而 C 末端氨基酸高度保守，其中 7 个半胱氨酸严格保守（图 1-3）。
图 1-3 绵羊、牛、猪、人、鼠、袋鼠、鳄鱼、鸡和斑马鱼 AMH 氨基酸序列的比对分析Fig. 1-3 Alignment of the deduced amino acid sequences ofAMH in ovine, cattle, pig, human, mouswallaby, alligator, chichen, and zebrafish：其中 N 末端的信号肽和 C 末端的序列均有箭头标识。潜在的活性激活位点均由文本框标识。TGFβ区域由阴，7 个保守的半胱氨酸加框显示。氨基酸的相似性由星点标识（：=高度相似，.=低度相似，*=完全一致）。te: The signal peptide sequence and the beginning of the N- and C-terminal domain for AMH in ovine are shownows. The peptide cleavage site in human as well as potential cleavage sites for AMH in other species are boxed and de TGF-β domain is grey-shaded and the 7 conserved cysteines of this domain are boxed. Identical and similar amino marked by asterisk and dots (: = strong score, . = weak score according to comparison matrix Gonnet Pampectively).
【参考文献】：
期刊论文
[1]快速石蜡切片法在免疫组化染色中的应用[J]. 张伟,周永梅,陈明城,王蔚. 中国组织化学与细胞化学杂志. 2011(04)
[2]超数排卵效果不同绵羊卵巢卵泡促卵泡素受体的分布[J]. 倪和民,张鸿波,刘云海,芦天罡,邓桂馨,郭勇. 中国农业科学. 2011(06)
[3]诱导幼羔卵泡发育及体外胚胎生产[J]. 陈晓勇,田树军,桑润滋,孙树春,赵驻军,李俊杰,敦伟涛. 农业生物技术学报. 2008(03)
[4]哺乳动物卵泡闭锁的研究[J]. 丁爱军,苏雷. 中国畜禽种业. 2007(06)
[5]关于石蜡切片在染色中脱蜡的探讨[J]. 荣玮,刘海燕. 解剖学杂志. 2006(01)
[6]颗粒细胞的增殖分化及其在卵泡发育中的作用[J]. 卢翠玲,杨巍,胡召元,刘以训. 科学通报. 2005(21)
[7]卵泡生长、分化和闭锁的调控[J]. 金萱,刘以训. 科学通报. 2003(14)
[8]煮沸法在石蜡切片抗原修复中应用的探讨[J]. 任学军,江昌新. 天津医科大学学报. 2001(01)
本文编号：2981215
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