犬副流感弱毒疫苗株全基因组序列分析及基因组全长cDNA克隆质粒、辅助质粒的构建
发布时间：2021-01-16 17:55
犬副流感（Canine parainfluenza）是由犬副流感病毒（Canine parainfluenza virus,CPIV）引起的一种犬的呼吸道传染病,临床上以发热、咳嗽和流涕为特征。CPIV也可引起急性脑脊髓炎和脑积水,临床表现为后肢麻痹和运动失调等。疫苗接种能有效预防该病,弱毒疫苗是目前使用最为广泛的犬副流感疫苗。本研究对犬副流感弱毒疫苗株NL/CPI/5进行了全基因组序列测定,并与GenBank中19株5型副流感病毒分离株基因组进行比较分析,结果显示:NL/CPI/5株全基因组长为15246个核苷酸（Nucleotides,nt）,与20142017年在中国分离的CC-14、ZJQ-221、BC14和HeN0718四个CPIV毒株的全基因组核苷酸数量一致。NL/CPI/5株与2009年韩国分离毒株1168-1的核苷酸序列同源性最高,同源率为99.9%,与中国分离毒株ZJQ-221、CC-14、BC14和HeN0718株的核苷酸同源率较高,分别为99.8%、99.1%、99%和97.1%。NL/CPI/5株与ZJQ-221、CC-14、BC14和He...
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
副粘病毒病毒粒子结构示意图（FieldsVirology,5thEdition）
PIV5 常被称为犬副流感病毒（Canine parainfluenza virus，苗接种可有效预防犬副流感，而弱毒疫苗是目前使用最为广泛的犬副了分析犬副流感弱毒疫苗株 NL/CPI/5 株与近几年在中国及周边国家IV 毒株在全基因组水平、主要抗原蛋白基因序列和氨基酸序列上的差异对 NL/CPI/5 株进行全基因组序列测定，并与 GenBank 中 19 株 PIV5 及抗原蛋白基因序列和氨基酸序列进行比较分析。试验材料病毒株PIV 弱毒株 NL/CPI/5 株由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所人兽共患团队保存，在 MDCK 细胞上扩增、滴定后，-70℃冻存备用。质粒粒 pBluscript Ⅱ KS（+/-）（CloNtech）由本实验室保存。
图 6 pBlueScript SK(+/-)载体多克隆位点图Fig.6 pBlueScript SK(+/-) multiple cloNiNg site map共患与外来烈性病团队制作并保存；质粒小提试剂盒（Plasmid Mini KitI）、胶回收试剂盒（Gel Extraction Kit）购自 OMEGAbio-tek 公司；RNA 提取试剂盒（RNeasyMini Kit）、莫洛尼氏鼠白血病逆转录酶（M-MLV RT）购自 Invitrogen 公司。2.1.4 仪器本实验用到主要仪器如下：双层空气恒温域（WEALTEC 公司）；生物安全柜、-70℃超低温冰箱、二氧化碳培养箱、小型高速离心机（Thermo 公司）；洁净工作台（北京东联哈尔仪器制造有限公司）；电子天平、全自动制冰机（HOSHIZAKI 公司）；三槽 PCR 仪（SENAQUEST 公司）；电泳仪（北京六一生物科技有限公司）；紫外凝胶成像系统（北京赛智创业科技有限公司）；微量移液器（Eppendorf 公司）；4℃冰箱（海尔公司）；DK-8D 型电热恒温水槽（上海精宏实验设备有限公司）；恒温振荡器（CRYSTAL 公司）；隔水式电热恒温培养箱（上海跃进医疗器械厂）；微波炉（Galanz 公司）；磁力搅拌器（上海梅颖浦仪器仪表制造有限公司）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]犬副流感流行毒株的分离与鉴定[J]. 金昌德,李六金,施新猷,师长宏,赵世君. 第四军医大学学报. 2000(06)
博士论文
[1]犬副流感病毒进化分析及核酸疫苗和犬腺病毒重组疫苗的研究[D]. 闫喜军.吉林大学 2007
本文编号：2981274
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
副粘病毒病毒粒子结构示意图（FieldsVirology,5thEdition）
PIV5 常被称为犬副流感病毒（Canine parainfluenza virus，苗接种可有效预防犬副流感，而弱毒疫苗是目前使用最为广泛的犬副了分析犬副流感弱毒疫苗株 NL/CPI/5 株与近几年在中国及周边国家IV 毒株在全基因组水平、主要抗原蛋白基因序列和氨基酸序列上的差异对 NL/CPI/5 株进行全基因组序列测定，并与 GenBank 中 19 株 PIV5 及抗原蛋白基因序列和氨基酸序列进行比较分析。试验材料病毒株PIV 弱毒株 NL/CPI/5 株由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所人兽共患团队保存，在 MDCK 细胞上扩增、滴定后，-70℃冻存备用。质粒粒 pBluscript Ⅱ KS（+/-）（CloNtech）由本实验室保存。
图 6 pBlueScript SK(+/-)载体多克隆位点图Fig.6 pBlueScript SK(+/-) multiple cloNiNg site map共患与外来烈性病团队制作并保存；质粒小提试剂盒（Plasmid Mini KitI）、胶回收试剂盒（Gel Extraction Kit）购自 OMEGAbio-tek 公司；RNA 提取试剂盒（RNeasyMini Kit）、莫洛尼氏鼠白血病逆转录酶（M-MLV RT）购自 Invitrogen 公司。2.1.4 仪器本实验用到主要仪器如下：双层空气恒温域（WEALTEC 公司）；生物安全柜、-70℃超低温冰箱、二氧化碳培养箱、小型高速离心机（Thermo 公司）；洁净工作台（北京东联哈尔仪器制造有限公司）；电子天平、全自动制冰机（HOSHIZAKI 公司）；三槽 PCR 仪（SENAQUEST 公司）；电泳仪（北京六一生物科技有限公司）；紫外凝胶成像系统（北京赛智创业科技有限公司）；微量移液器（Eppendorf 公司）；4℃冰箱（海尔公司）；DK-8D 型电热恒温水槽（上海精宏实验设备有限公司）；恒温振荡器（CRYSTAL 公司）；隔水式电热恒温培养箱（上海跃进医疗器械厂）；微波炉（Galanz 公司）；磁力搅拌器（上海梅颖浦仪器仪表制造有限公司）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]犬副流感流行毒株的分离与鉴定[J]. 金昌德,李六金,施新猷,师长宏,赵世君. 第四军医大学学报. 2000(06)
博士论文
[1]犬副流感病毒进化分析及核酸疫苗和犬腺病毒重组疫苗的研究[D]. 闫喜军.吉林大学 2007
本文编号：2981274
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