PRRSV recCH-1R嵌合病毒构建及PRRS和CSF活疫苗细胞免疫评价
发布时间：2021-01-16 19:17
猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是一种主要以妊娠母猪的繁殖障碍和仔猪严重的呼吸道症状为主要特征的传染病。PRRS自暴发以来，给全球养猪业带来了巨大的经济损失。该病的病原体-猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV），属于动脉炎病毒科动脉炎病毒属，为有囊膜的单股正链RNA病毒。本实验室成功构建了CH-1R致弱毒株（CH-1a传代第171代）的全长cDNA分子克隆rCH-1R，并获得了该克隆的拯救病毒-recCH-1R。在本研究中，将PCV2-Cap基因插入到rCH-1R的ORF1b和ORF2a之间；然后，分别用高致病性PRRSVHuN4株的GP5基因和GP5+M基因替换rCH-1R株的相应基因，最终成功获得了3株嵌合病毒：recCH-1R-PCV2-Cap、recCH-1R-HuN4-GP5和recCH-1R-HuN4-GP5+M。通过RT-PCR检测、细胞病变观察、间接免疫荧光试验、电镜观察和一步生长...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：89 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PRRSV粒子结构模式图
中 国农 业 科 学院 硕士 学位 论文 第 一章 引 言O RF （s C o n z el m a nn et a l. , 1 99 3 ） ，它们 具 有 病 毒 基 因 组 RN A5 ’端 非 编 码 区 共 同 的 前 导 序列 （图 1 .2 ） 。病毒 基 因 组 的 mR N A1 转 录 2 个 O RF s - O RF 1 a 和 O RF 1 b ，主 要 编码 病 毒的 复 制酶 蛋 白， 位 于基 因 组 5’ 端 约四 分 之三 处 。 O RF 1 a 和 O RF 1 b 编码 2 个长 的非 结 构 蛋白 多 聚蛋 白 （ po l y p r o te i n ） - pp 1 a和 pp 1 a b， 后 者的 表 达 取决 于 在 O RF 1 a 和 O RF 1 b 重叠 区域 的 核 糖体 移 码 信号 （d e n Bo o n et a l. , 1 99 1 Sn i j d e r ＆ Me u l e n be r g, 19 98 ） ， 在基 因 组 mR N A 合成 之后 ， 通 过由 O RF 1 a 编码 的 蛋白 酶 结 构域 引 导的 1 个复 杂 的 蛋 白 水解 级联 反 应 ， pp 1a 和 pp 1a b 复制 多 聚 蛋 白 被加 工 成具 有 功 能 性 的非 结 构 蛋 白（ N on - st r uc t ur e pr ot ei n s , N sp s ）（S n ij d er ＆ Me u l e n b er g, 19 98 ; va n Ak en et a l. , 20 0 6b ; Zi e bu hr et a l. 20 0 0 ）， 有 14 种 ， 包 含 4 种 蛋白 酶 N sp 1 α 、 N sp 1 β 、 N sp 2 和 N sp 4 ， N sp 9 是 1 种 RN A 依 赖性 的RN A 聚 合酶 （R N A- de p e nd e nt RN A po ly m e r a se , Rd R p ），N sp 1 0 是 1 种 RN A 解旋 酶 （H el i c a se , H el ），N sp 1 1 是 1 种 核 酸 内 切 酶 （ en d o nu c le a se ）（ D en Bo o n et a l. , 1 99 5 ; Sn i j d er ＆ Me u l e n be r g, 19 9 8; va nAk e n et
业 科 学院 硕士 学位 论文 第 一用 途 （ P e i et a l. , 20 09 ） 。细 胞 因 子 IL - 1β 作 为感 染 中的 1 个潜 在 的 炎 性 调节 因 子， 常 被 剂 ，有 研 究者 将 猪 IL - 1β 插入 到 感 染 性 克隆 P1 2 9 的 O RF 1 b 和 O RF 2 a 之间 ， 构 建 了 重 9 /s w I L1 β ，在 该 病毒 感 染 Ma rc - 1 45 细 胞 3 6 h 之后 ， 每 2 × 10 5个细 胞能 分 泌 19 4 7 pg 的实 验 显 示 ，v P 1 2 9 /s w IL 1 β感 染 猪没 有 出现 可 见的 临 床 标 志 ，而 亲 本病 毒 感染 猪 具有 非 吸 窘 迫 和 嗜睡 现 象 。在 感 染后 7 d 和 1 4 d， 外 周 血 中 IL - 1β 、 I L - 4 和 IF N - γ 表达 量上 调 组 PR R S V 可 以作 为 研究 不 同 细 胞 因子 在 疾病 进 程 和 免疫 反 应中 功 能的 有 用 的 工 具 （, 20 1 2） 。哈尔 滨 兽 医 研究 所 对国 内 PR R S V 经典 株 CH - 1a 株致 弱 过程 中 4 个 不同 代 次毒 株 进 行 隆 和 测 序 ，分 析 其传 代变 化 情 况 （ 石文 达 等 ， 2 01 0 ） ，并 在 此基 础 上构 建 了 CH -1 R 致H - 1a 传代 第 17 1 代） 全长 cD N A 分子 的克 隆 （图 1. 3） ，成 功地 拯 救了 该 病 毒 。 PR R S V因 组 全 长 1 54 2 4 nt ，采 用 人 类 巨 细 胞 病 毒 （ h u m a n cy t o m e g a lo v ir u s , hC MV ）启 动 子 ， 粒 D NA 能够 直 接 转染 至 Ma rc - 1 45 细胞 ， 并 产 生细 胞 病 变。 在 r ec C H - 1R 93 72 b p 处引 ， 插 入 唯 一 的 酶 切位 点 Sp e Ⅰ作 为遗 传 标记 ，该 子 代病 毒 与亲 本 毒株 CH - 1 a 相比 ，在 性 和 体 内 致病 性 上
本文编号：2981383
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：89 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PRRSV粒子结构模式图
中 国农 业 科 学院 硕士 学位 论文 第 一章 引 言O RF （s C o n z el m a nn et a l. , 1 99 3 ） ，它们 具 有 病 毒 基 因 组 RN A5 ’端 非 编 码 区 共 同 的 前 导 序列 （图 1 .2 ） 。病毒 基 因 组 的 mR N A1 转 录 2 个 O RF s - O RF 1 a 和 O RF 1 b ，主 要 编码 病 毒的 复 制酶 蛋 白， 位 于基 因 组 5’ 端 约四 分 之三 处 。 O RF 1 a 和 O RF 1 b 编码 2 个长 的非 结 构 蛋白 多 聚蛋 白 （ po l y p r o te i n ） - pp 1 a和 pp 1 a b， 后 者的 表 达 取决 于 在 O RF 1 a 和 O RF 1 b 重叠 区域 的 核 糖体 移 码 信号 （d e n Bo o n et a l. , 1 99 1 Sn i j d e r ＆ Me u l e n be r g, 19 98 ） ， 在基 因 组 mR N A 合成 之后 ， 通 过由 O RF 1 a 编码 的 蛋白 酶 结 构域 引 导的 1 个复 杂 的 蛋 白 水解 级联 反 应 ， pp 1a 和 pp 1a b 复制 多 聚 蛋 白 被加 工 成具 有 功 能 性 的非 结 构 蛋 白（ N on - st r uc t ur e pr ot ei n s , N sp s ）（S n ij d er ＆ Me u l e n b er g, 19 98 ; va n Ak en et a l. , 20 0 6b ; Zi e bu hr et a l. 20 0 0 ）， 有 14 种 ， 包 含 4 种 蛋白 酶 N sp 1 α 、 N sp 1 β 、 N sp 2 和 N sp 4 ， N sp 9 是 1 种 RN A 依 赖性 的RN A 聚 合酶 （R N A- de p e nd e nt RN A po ly m e r a se , Rd R p ），N sp 1 0 是 1 种 RN A 解旋 酶 （H el i c a se , H el ），N sp 1 1 是 1 种 核 酸 内 切 酶 （ en d o nu c le a se ）（ D en Bo o n et a l. , 1 99 5 ; Sn i j d er ＆ Me u l e n be r g, 19 9 8; va nAk e n et
业 科 学院 硕士 学位 论文 第 一用 途 （ P e i et a l. , 20 09 ） 。细 胞 因 子 IL - 1β 作 为感 染 中的 1 个潜 在 的 炎 性 调节 因 子， 常 被 剂 ，有 研 究者 将 猪 IL - 1β 插入 到 感 染 性 克隆 P1 2 9 的 O RF 1 b 和 O RF 2 a 之间 ， 构 建 了 重 9 /s w I L1 β ，在 该 病毒 感 染 Ma rc - 1 45 细 胞 3 6 h 之后 ， 每 2 × 10 5个细 胞能 分 泌 19 4 7 pg 的实 验 显 示 ，v P 1 2 9 /s w IL 1 β感 染 猪没 有 出现 可 见的 临 床 标 志 ，而 亲 本病 毒 感染 猪 具有 非 吸 窘 迫 和 嗜睡 现 象 。在 感 染后 7 d 和 1 4 d， 外 周 血 中 IL - 1β 、 I L - 4 和 IF N - γ 表达 量上 调 组 PR R S V 可 以作 为 研究 不 同 细 胞 因子 在 疾病 进 程 和 免疫 反 应中 功 能的 有 用 的 工 具 （, 20 1 2） 。哈尔 滨 兽 医 研究 所 对国 内 PR R S V 经典 株 CH - 1a 株致 弱 过程 中 4 个 不同 代 次毒 株 进 行 隆 和 测 序 ，分 析 其传 代变 化 情 况 （ 石文 达 等 ， 2 01 0 ） ，并 在 此基 础 上构 建 了 CH -1 R 致H - 1a 传代 第 17 1 代） 全长 cD N A 分子 的克 隆 （图 1. 3） ，成 功地 拯 救了 该 病 毒 。 PR R S V因 组 全 长 1 54 2 4 nt ，采 用 人 类 巨 细 胞 病 毒 （ h u m a n cy t o m e g a lo v ir u s , hC MV ）启 动 子 ， 粒 D NA 能够 直 接 转染 至 Ma rc - 1 45 细胞 ， 并 产 生细 胞 病 变。 在 r ec C H - 1R 93 72 b p 处引 ， 插 入 唯 一 的 酶 切位 点 Sp e Ⅰ作 为遗 传 标记 ，该 子 代病 毒 与亲 本 毒株 CH - 1 a 相比 ，在 性 和 体 内 致病 性 上
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