LPS诱导鸡几个炎症反应相关基因的表达调控研究

发布时间：2017-04-11 03:04

  本文关键词：LPS诱导鸡几个炎症反应相关基因的表达调控研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：鸡大肠杆菌病是影响禽业生产的主要疾病之一,能够引起不同品系、不同日龄鸡多种组织脏器发生炎症反应,给养禽业带来巨大经济损失。本研究以大肠杆菌脂多糖(LPS)作用于海兰褐雏鸡、AA+肉雏鸡以及成年产蛋母鸡,分析炎症反应相关基因akirin2、PPARγ、NYGGF4以及mi RNA的表达特性,为深入理解炎症反应分子机制和分子诊断标记物候选基因的筛选提供理论参考。主要研究方法和实验结果如下:为深入研究雏鸡炎症反应中相关基因的表达特性和调控关系,本实验分别以AA+肉仔鸡和海兰褐蛋雏鸡为研究对象,采用LPS腹腔接种雏鸡,72h后收集血液、肝脏、胸腺、法氏囊和脾脏等组织,利用RT-PCR定量分析炎症相关基因akirin2、PPARγ和几种mi RNA的转录活性变化。结果表明:在LPS接种的肉仔鸡中,akirin2和PPARγ基因在肝脏和法氏囊中均显著下调(P0.01);在LPS接种的海兰褐雏鸡中,akirin2基因在胸腺中表达显著上调(P0.01),而PPARγ基因在各组织中表达均差异不显著;此外,mi R-146a(P0.05)、mi R-21(P0.01)和mi R-155(P0.01)在LPS接种的2个品系雏鸡肝脏中表达均显著下调。雏鸡接种LPS后,在红细胞中,海兰褐雏鸡的mi R-155、mi R-146a、mi R-181a和mi R-21的表达活性均降低,而AA+肉鸡却呈现相反的表达趋势。在白细胞中,mi R-155和mi R-21表达均上调,其中,mi R-146a和mi R-181a在海兰褐鸡中均显著下调(P0.05),但在AA+肉鸡中均显著上调(P0.05)。在血浆中,2个品系雏鸡的mi R-146a和mi R-181a表达活性均显著下调(P0.05)。为深入研究鸡NYGGF4基因的功能,首先对四个品系鸡的NYGGF4基因进行生物信息学分析,然后分析该基因的组织表达特性,最后验证该基因是否与炎症反应相关。实验结果表明:在四个品系鸡NYGGF4基因编码区内存在8个SNP位点。14日龄海兰褐雏鸡NYGGF4基因在脑中的表达量最高,而在AA+肉鸡的肺和脂肪组织中表达量最高,在其他组织中两个品系鸡都具有相似的表达特性。在炎症反应中,NYGGF4基因在海兰褐鸡和AA+肉鸡的肝脏和法氏囊中的表达活性表现出相反的变化。为深入研究成鸡输卵管炎的分子机制,本研究利用LPS制备海兰褐成年母鸡泄殖腔上行性感染急性炎症反应模型,并定量分析炎性组织相关基因的转录活性变化。实验结果表明:正常母鸡akirin2基因在输卵管各区段均高表达,而PPARγ基因仅在阴道和卵巢组织中具有较高表达活性。炎症反应中,akirin2基因在子宫、直肠和盲肠扁桃体中转录活性均显著上调,PPARγ基因仅在子宫中转录活性显著上调(P0.01),而在直肠(P0.01)和盲肠扁桃体中转录活性下调。本研究表明,akirin2、PPARγ和NYGGF4基因是影响炎症反应的重要调控基因,研究这些基因在炎症反应中的表达与调控关系,对于深入理解炎症反应分子机制具有重要的理论意义。此外,某些mi RNAs在炎症反应中的体液循环中变化显著,可能成为炎症诊断分子标记物的重要靶基因之一。
【关键词】：鸡 炎症反应 akirin2 PPARγ mi RNA NYGGF4
【学位授予单位】：哈尔滨师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.31
【目录】：

• 摘要9-11
• Abstract11-13
• 第1章 绪论13-25
• 1.1 细菌脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）13-14
• 1.1.1 LPS与炎症反应13-14
• 1.1.2 LPS与禽业生产14
• 1.2 Akirin2基因的研究进展14-15
• 1.2.1 Akirin基因简介14
• 1.2.2 Akirin2基因在免疫与炎症中的作用14-15
• 1.3 PPARγ 基因研究进展15-16
• 1.3.1 PPARγ 基因简介15-16
• 1.3.2 PPARγ 基因在炎症反应中的作用16
• 1.4 NYGGF4基因研究进展16-17
• 1.4.1 NYGGF4基因的发现及命名16-17
• 1.4.2 NYGGF4基因的表达特性及功能17
• 1.5 microRNA的研究进展17-23
• 1.5.1 microRNA简介17-18
• 1.5.2 miRNA的生物学功能18
• 1.5.3 miRNA与免疫18
• 1.5.4 miR-155研究进展18-19
• 1.5.5 miR-146a研究进展19-21
• 1.5.6 miR-21研究进展21-22
• 1.5.7 miR-181a研究进展22-23
• 1.6 研究的目的和意义23-25
• 第2章 LPS诱导不同品系雏鸡炎症反应相关基因的表达调控研究25-38
• 2.1 实验材料25-27
• 2.1.1 实验动物25
• 2.1.2 大肠杆菌LPS25
• 2.1.3 引物25-26
• 2.1.4 试剂26
• 2.1.5 主要仪器设备26-27
• 2.2 试验方法27-30
• 2.2.1 雏鸡免疫27
• 2.2.2 总RNA的提取27
• 2.2.3 cDNA的合成27-28
• 2.2.4 PCR扩增目的基因28-30
• 2.2.5 PCR产物电泳30
• 2.2.6 统计分析30
• 2.3 实验结果30-35
• 2.3.1 临床症状30-31
• 2.3.2 总RNA提取结果31
• 2.3.3 LPS诱导不同品系雏鸡akirin2和PPARγ 基因的表达分析31-35
• 2.4 讨论35-37
• 2.5 本章小结37-38
• 第3章 LPS诱导不同品系雏鸡血液相关miRNA的表达调控研究38-48
• 3.1 实验材料38
• 3.1.1 实验动物38
• 3.1.2 引物38
• 3.2 实验方法38-41
• 3.2.1 鸡血分离38-39
• 3.2.2 白细胞分类计数测定39
• 3.2.3 总RNA的提取39
• 3.2.4 RT-PCR39-41
• 3.2.5 PCR产物电泳41
• 3.2.6 统计分析41
• 3.3 实验结果41-45
• 3.3.1 血细胞计数分析41
• 3.3.2 LPS诱导相关miRNA的表达分析41-45
• 3.4 讨论45-47
• 3.4.1 LPS诱导不同品系雏鸡红细胞中miRNA的表达活性分析45-46
• 3.4.2 LPS诱导不同品系雏鸡白细胞中miRNA的表达活性分析46
• 3.4.3 LPS诱导不同品系雏鸡血浆中miRNA的表达活性分析46-47
• 3.5 本章小结47-48
• 第4章 不同品系鸡NYGGF4基因克隆与表达分析48-67
• 4.1 实验材料48-49
• 4.1.1 实验动物48
• 4.1.2 质粒与菌种48
• 4.1.3 酶和生化试剂48-49
• 4.1.4 引物49
• 4.2 实验方法49-53
• 4.2.1 T-A克隆49-52
• 4.2.2 生物信息学分析52-53
• 4.2.3 半定量RT-PCR组织表达谱分析53
• 4.2.4 炎症和免疫反应模型的组织表达谱分析53
• 4.3 实验结果53-64
• 4.3.1 AA+肉仔鸡和三黄鸡NYGGF4基因的克隆53-57
• 4.3.2 生物信息学分析57-61
• 4.3.3 不同品系鸡NYGGF4基因表达谱分析61-63
• 4.3.4 炎症反应模型中各组织NYGGF4基因的转录活性分析63-64
• 4.4 讨论64-66
• 4.4.1 不同品系鸡NYGGF4基因编码序列的比较64-65
• 4.4.2 不同品系鸡NYGGF4二级结构预测及差异比较65
• 4.4.3 不同品系鸡NYGGF4基因组织表达谱分析65-66
• 4.4.4 LPS炎症模型中NYGGF4基因的表达分析66
• 4.5 本章小结66-67
• 第5章 鸡输卵管与大肠炎症反应相关基因的表达调控分析67-78
• 5.1 实验材料67-68
• 5.1.1 实验动物67
• 5.1.2 引物67-68
• 5.1.3 酶和生化制剂68
• 5.2 实验方法68-70
• 5.2.1 实验分组与样品采集68
• 5.2.2 总RNA的提取68
• 5.2.3 逆转录反应合成cDNA68-69
• 5.2.4 PCR扩增目的基因69-70
• 5.2.5 PCR产物电泳70
• 5.2.6 统计分析70
• 5.3 实验结果70-74
• 5.3.1 临床症状与病理变化70-71
• 5.3.2 总RNA提取结果71-72
• 5.3.3 母鸡卵巢和输卵管各部分组织akirin2和PPARγ 基因的转录活性分析72-73
• 5.3.4 炎症反应模型中各组织akirin2和PPARγ 的转录活性分析73-74
• 5.3.5 Akirin2下游靶基因的转录活性分析74
• 5.4 讨论74-77
• 5.4.1 母鸡卵巢和输卵管各部分组织akirin2和PPARγ 基因的转录活性分析75
• 5.4.2 炎症反应模型中各组织akirin2和PPARγ 的转录活性分析75-76
• 5.4.3 Akirin2下游靶基因的转录活性分析76-77
• 5.5 本章小结77-78
• 结论78-79
• 参考文献79-93
• 攻读硕士学位期间发表学术论文93-95
• 致谢95

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