禽偏肺病毒的分离鉴定及Nested RT-PCR检测方法的建立与应用

发布时间：2021-01-17 00:08

　　禽偏肺病毒（Avian metapneumovirus, aMPV），是家禽常见的呼吸道病原之一。aMPV感染火鸡可引起火鸡鼻气管炎，感染产蛋鸡可导致产蛋率下降、孵化率降低。aMPV也被认为是肉鸡肿头综合征（Swollen head syndrome, SHS）的重要诱发因素之一。aMPV于1978年首次在南非报道之后，欧洲、亚洲等地陆续出现该病毒的相关报道。aMPV可以分为A、B、C、D4个亚型，其中A亚型和B亚型在世界各地广泛报道，C亚型和D亚型分别在美国和法国报道。中国大陆地区仅于1999年报道分离到1株禽偏肺病毒；2007-2008年的血清学调查结果显示山东某些地区种鸡血清学阳性率可达100%；2009-2010年，孙静等利用地高辛标记的核酸探针对山东省部分地区临床健康肉鸡群的多种呼吸道病原进行检测，aMPV检出率高达36.87%，而且多重感染现象严重，aMPV对养禽业的危害不容忽视。本研究使用建立的aMPV Nested RT-PCR检测方法，对aMPV进行了分离鉴定，并对分离株的部分特性进行了初步研究，从而为该病的预防控制提供理论依据。本研究内容主要分为两部分：1、禽偏肺病... 

【文章来源】：山东农业大学山东省

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

第一次PCR扩增结果

阳性病料的组织 RNA，进行反转录后，依次用果均得到一条特异性条带：第一次 PCR所得目目的条带大小为 415 bp，均与预期片段大小图 1、图 2 所示。图 1 第一次 PCR扩增结果Fig. 1 The result of the first PCR amplificationM. DNA 分子量标准； 1-5. PCR 产物；6. 阴性对照;M. DL 2000 Marker;1-5.The PCR products;6.Negative co

3.1.3 特异性试验结果应用该方法能够从aMPV阳性鸡胚尿囊液中特异性的扩增出预期的415 bp条带，而对H9亚型AIV、NDV、IBV、ILTV的扩增没有出现该片段，结果均为阴性(见图5)。图 5 逆转录套式 PCR方法检测禽偏肺病毒的特异性试验结果Fig. 5 Specificity of nested RT-PCR assay for aMPVM: DNA 分子量标准; 1-2 为 aMPV 阳性尿囊液; 3-6 分别为AIV, NDV, IBV, ILTV; 7: 阴性对照M: DL2000 DNA Marker; 1-2: Positive allantoic fluid; 3-6:AIV,NDV, IBV, ILTV, respectively;7: Nega

【参考文献】：
期刊论文
[1]禽偏肺病毒地高辛核酸探针的制备与应用[J]. 陈琳,刁有祥,鞠小军,慕榕,郑新颖,刘霞,孙静,吴海洋.  中国兽医学报. 2012(01)
[2]种鸡禽肺病毒感染的血清学调查[J]. 郭龙宗,曲立新.  中国畜牧兽医. 2009(04)
[3]禽肺病毒的分离鉴定[J]. 沈瑞忠,曲立新,于康震,李建伟,张建林,谷守林,徐宜为,唐桂运.  中国预防兽医学报. 1999(01)



本文编号：2981800