纳米铜对大鼠肝脏毒性的差异蛋白组学研究

发布时间：2021-01-17 00:45

　　纳米铜是较为常见的人造金属纳米材料。目前，已有相关的研究资料显示纳米铜可能对人类和环境存在潜在的危害，但是其毒性机制尚未清楚。为了研究纳米铜的毒性机制，本试验将大鼠随机分成溶剂对照组（1％HPMC）、纳米铜50mg/kg组、纳米铜200mg/kg组，利用传统毒理学的方法观察纳米铜重复染毒5d（1次/d）后大鼠的临床表现、血液生化指标和组织病理学变化等毒理学效应；采用TCA-丙酮沉淀法提取蛋白，Bradford法定量蛋白，聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测蛋白分离纯化情况，同时对双向电泳不同上样量进行探索，建立大鼠肝脏蛋白质组学研究技术平台；然后以正常大鼠肝脏和不同程度染毒大鼠的肝脏为试验材料，利用双向电泳技术建立纳米铜对大鼠肝脏毒性的蛋白质表达图谱；使用PDQuest8.0软件对凝胶图谱进行分析，并用生物质谱对差异表达蛋白质进行鉴定，同时对差异斑点3D扫描视图；最后使用荧光定量PCR和Western-blot方法进行验证。结果显示：①200mg/kg纳米铜能引起大鼠出现体重降低、腹泻、行为失调、反应及呼吸减弱等中毒症状，与肝功能相关的ALT、ALP、TCHO、TP等血清生化指标... 

【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Summary
外文缩略词表
第一部分 文献综述蛋白组学技术在纳米药物毒性研究中的应用
    1 纳米技术
    2 纳米材料的安全性研究进展
        2.1 纳米材料的研究现状
        2.2 纳米材料的毒性研究概况
        2.3 纳米铜的研究概况
    3 蛋白组学在纳米药物毒性研究中的研究进展
        3.1 系统毒理学研究概况
        3.2 蛋白组学及其技术手段
        3.3 蛋白组学在药物毒性研究中的应用
    4 存在问题及展望
    5 本研究的目的意义及主要内容
第二部分 试验研究纳米铜对大鼠肝脏毒性的差异蛋白组学研究
    前言
    试验一 纳米铜的亚急性毒性试验
        1 材料
            1.1 实验动物
            1.2 仪器
            1.3 试剂
        2 方法
            2.1 实验动物分组及染毒方式
            2.2 生化指标分析
            2.3 组织病理学检查
            2.4 统计方法
        3 结果
            3.1 一般毒性
            3.2 体重及脏器系数
            3.3 生化指标变化
            3.4 组织病理学变化
        4 讨论
    试验二 纳米铜对大鼠肝脏毒性的2-DE图谱的构建及初步分析
        1 材料
            1.1 样品
            1.2 仪器
            1.3 试剂
        2 方法
            2.1 中毒大鼠肝脏蛋白样品的制备
            2.2 蛋白质定量
            2.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白分离纯化情况
            2.4 双向电泳
        3 结果
            3.1 蛋白定量结果
            3.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳结果
            3.3 凝胶图谱的获取
        4 讨论
    试验三 纳米铜对大鼠肝脏毒性的差异蛋白质组学研究
        1 材料
            1.1 肝脏蛋白
            1.2 仪器
            1.3 试剂
        2 方法
            2.1 肝脏蛋白的溶解
            2.2 双向电泳
            2.3 质谱检测
        3 结果
            3.1 2-DE图谱的获取
            3.2 质谱鉴定结果
        4 讨论
    试验四 部分差异蛋白的荧光定量PCR及Western-blot验证
        1 材料
            1.1 仪器
            1.2 试剂
        2 方法
            2.1 组织样品
            2.2 总RNA的提取
            2.3 提取的总RNA的检测
            2.4 引物的设计与合成
            2.5 荧光定量PCR
            2.6 Western-blot分析
        3 结果
            3.1 总RNA提取结果
            3.2 部分差异蛋白点在mRNA水平表达情况
            3.3 Western-blot结果
        4 讨论
结论
参考文献
致谢
作者简介
导师简介



本文编号：2981860