羊口疮病毒ORFV129锚蛋白在山羊睾丸细胞中的亚细胞定位

发布时间：2021-01-17 20:07

　　为明确羊口疮病毒ORFV129锚蛋白在细胞中的定位,参照GenBank中收录的ORFV SY 17全基因组（登录号:MG 712417.1）序列设计引物,扩增ORFV129基因完整编码框并测序鉴定,利用生物信息学软件分析该基因编码蛋白的氨基酸序列、蛋白跨膜区域,预测其亚细胞定位;并将ORFV129完整基因连接到真核表达载体pEGFP-N1,经双酶切鉴定及测序鉴定是否成功构建重组表达质粒pEGFP-ORFV129;利用LipoGene^TM 2000介导将pEGFP-ORFV129转染新生山羊睾丸原代细胞,通过Western Blot鉴定ORFV129蛋白是否正确表达,同时,经DAPI核酸染料对细胞核进行染色后,激光共聚焦显微镜观察ORFV129蛋白的亚细胞定位。结果显示,成功扩增ORFV129完整基因,该基因全长大小为1 551 bp,测序鉴定其正确;生物信息学分析发现,其编码516个氨基酸,含有8种锚蛋白ANKs重复基序（ANKs）,不存在跨膜区域,亚细胞定位预测其蛋白主要定位于细胞质;Western Blot结果显示,转染了pEGFP-ORFV129重组质粒的山... 

【文章来源】：华北农学报. 2020,35(04)北大核心

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

ORFV129基因克隆及重组质粒鉴定

转染12～24 h后,将融合载体pEGFP-ORFV129和空载体pEGFP-N1置于荧光倒置显微镜下,均能观察到绿色荧光(图4)。mRNA表达检测发现,细胞总RNA经RT-PCR扩增后,可见与预期ORFV129基因大小相似的目的条带(图5),表明ORFV129基因在细胞中ORFV复制期间发生了转录。图3 pEGFP-ORFV129的酶切鉴定

pEGFP-ORFV129的酶切鉴定

【参考文献】：
期刊论文
[1]羊口疮病毒ORF128锚蛋白对HEK293T细胞NF-κB信号通路的调节作用及机制[J]. 安雪珂,贾怀杰,冯园,陈国华,何小兵,景志忠,王晓霞.  细胞与分子免疫学杂志. 2019(03)
[2]羊口疮病毒ORF129基因的原核表达、纯化及鉴定[J]. 杜国玉,刘永杰,吴锦艳,王光祥,尚佑军,张勇.  中国畜牧兽医. 2018(07)
[3]羊口疮病毒GDZC株锚蛋白基因的克隆及序列分析[J]. 葛士坤,张凯照,刘健新,王晴楠,于梦,陶攀,宁章勇.  中国畜牧兽医. 2016(12)
[4]口疮病毒B4R锚蛋白抑制细胞NF-κB信号通路的研究[J]. 冯园,贾怀杰,何小兵,成温玉,陈国华,王春燕,何玉林,景志忠.  中国兽医科学. 2016(11)
[5]锚蛋白重复序列通过NF-κB信号通路参与肠炎相关肿瘤的调控[J]. 王少鑫,靳宝锋,崔立红.  世界华人消化杂志. 2015(02)
[6]羊口疮病毒ORF129基因重组质粒的构建及其在BHK-21细胞中的表达[J]. 白刚,贾怀杰,何小兵,王盈盈,何妍萍,吴润,景志忠.  甘肃农业大学学报. 2013(05)
[7]羊口疮病毒分子生物学的研究进展[J]. 闫丰超,邵佳,窦永喜.  中国兽医科学. 2013(01)

硕士论文
[1]羊口疮病毒119蛋白诱导细胞凋亡分子机制的研究[D]. 陈慧芹.南方医科大学 2017



本文编号：2983517