选择压作用下J亚群禽白血病病毒突变位点的研究
发布时间：2021-01-19 08:24
禽白血病病毒（ALV）属于反转录病毒科甲型反转录病毒属禽反转录病毒，引起禽造血组织中某些细胞成分的肿瘤性增生。而主要引起髓细胞性白血病的ALV-J是目前广为流行的一个亚群，自1988年Payne首次从肉鸡中分离出此病毒后，该病现已呈世界性分布。我国于1999和2004年分别从肉鸡和蛋鸡中分离出该病毒，此后陆续有地方品种鸡感染此病的报道。ALV-J自我国出现以来，其感染宿主范围不断扩大，但其还没有突破种间屏障而感染与鸡亲缘性关系更远的品种，如雉，鹌鹑等。本研究建立了3种选择压模型，体外实验通过选择抑制物叠氮胸苷（AZT），在DF-1细胞上干扰ALV-J NX0101株的复制，对病毒连续传代后观察病毒在AZT作用下囊膜基因的突变情况。体外宿主细胞之间的依次过渡，观察病毒在不同宿主细胞作用下囊膜基因突变情况。体内实验通过人工模拟自然感染ALV-J NX0101株，将ALV-J依次人工感染易感宿主禽（SPF鸡，火鸡），然后过渡到抗性宿主禽（鹌鹑，山鸡，鸭），观察宿主禽病理变化，分析感染后宿主禽排毒规律及分离株囊膜基因遗传进化规律，解析不同宿主禽的过渡后ALV-J NX0101株的跨种传播机制。...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ALV病毒粒子结构（出自禽病学，11版）
图 2ALV-J 逐一接种动物宿主图示Fig. 2 Schematic diagram of the order of virus inoculation and isolation.2.10 体内感染不同宿主品种禽后病毒血症监测ALV p27 抗原检测（参照试剂盒说明）：1）1mL PBS 溶液稀释泄殖腔棉拭子样品，-80℃反复冻融 3 次。2）取出抗 p27 抗体包被板，记录样品的位置。3）在适当的两孔中加入 100μL 阳性对照和阴性对照。4）在剩余的孔中加入 100μL 被检样品。盖好反应板，在 18-26℃的条件下in（±5min）。5）用大约 350μL 的双蒸水或去离子水洗涤板孔，重复 3-5 次，最后一次洗体拍干。7）毎孔加入 100μL 兔抗 p27，辣根过氧化物酶标记抗体。盖好反应板，在 1条件下孵育 60min（±5min）。
图 3 目的基因与内参基因反转录鉴定ig. 3 RT-PCR identification for NX0101 gene and GAPDH g的基因切鉴定基因 PCR 扩增后，切取目的条带连接入 P，基因测序目的基因与内参基因的同源性目的片段(图 4)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]PI3K/Akt信号转导通路在ALV-J感染中作用的初步研究[J]. 冯少珍,李娇,吴晓婵,曹伟胜,廖明. 中国农业科学. 2011(16)
[2]HIV的起源与SIV的跨种传播[J]. 李敬云. 军事医学科学院院刊. 2009(06)
[3]蛋鸡中发现J亚群白血病与网状内皮增生症自然混合感染[J]. 成子强,张玲娟,刘杰,刘思当,赵振华,张利,崔治中. 中国兽医学报. 2006(06)
[4]Evolution of gp85 gene of subgroup J avian leukosis virus under the selective pressure of antibodies[J]. WANG Zhengfu & CUI Zhizhong College of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Agricultural University, Taian 271018, China. Science in China（Series C:Life Sciences）. 2006(03)
[5]中国麻鸡中发现禽J亚群白血病[J]. 成子强,张利,刘思当,张玲娟,崔治中. 微生物学报. 2005(04)
[6]NHE基因研究进展[J]. 滕小春,刘海峰. 肿瘤防治研究. 2005(03)
[7]禽白血病病毒J亚群内蒙株的分离与鉴定[J]. 杨玉莹,叶建强,赵振华,秦爱建,顾玉芳. 中国病毒学. 2003(05)
[8]间接荧光抗体法快速诊断海兰褐蛋鸡J亚群禽白血病的研究[J]. 徐镔蕊,董卫星,何召庆,冯小宇,余春明,张丽,任艳丽,L F LEE,Mao-xiang LI. 中国兽医杂志. 2002(09)
[9]商品代肉鸡J亚群禽白血病的病理及病毒分离鉴定[J]. 张志,崔治中,赵宏坤,王海蓉,许益明. 中国兽医杂志. 2002(06)
[10]我国鸡群中免疫抑制性病毒多重感染的诊断和对策[J]. 崔治中. 动物科学与动物医学. 2001(04)
博士论文
[1]J亚群禽白血病病毒Env蛋白分子生物学特性研究[D]. 叶建强.扬州大学 2005
本文编号：2986666
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ALV病毒粒子结构（出自禽病学，11版）
图 2ALV-J 逐一接种动物宿主图示Fig. 2 Schematic diagram of the order of virus inoculation and isolation.2.10 体内感染不同宿主品种禽后病毒血症监测ALV p27 抗原检测（参照试剂盒说明）：1）1mL PBS 溶液稀释泄殖腔棉拭子样品，-80℃反复冻融 3 次。2）取出抗 p27 抗体包被板，记录样品的位置。3）在适当的两孔中加入 100μL 阳性对照和阴性对照。4）在剩余的孔中加入 100μL 被检样品。盖好反应板，在 18-26℃的条件下in（±5min）。5）用大约 350μL 的双蒸水或去离子水洗涤板孔，重复 3-5 次，最后一次洗体拍干。7）毎孔加入 100μL 兔抗 p27，辣根过氧化物酶标记抗体。盖好反应板，在 1条件下孵育 60min（±5min）。
图 3 目的基因与内参基因反转录鉴定ig. 3 RT-PCR identification for NX0101 gene and GAPDH g的基因切鉴定基因 PCR 扩增后，切取目的条带连接入 P，基因测序目的基因与内参基因的同源性目的片段(图 4)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]PI3K/Akt信号转导通路在ALV-J感染中作用的初步研究[J]. 冯少珍,李娇,吴晓婵,曹伟胜,廖明. 中国农业科学. 2011(16)
[2]HIV的起源与SIV的跨种传播[J]. 李敬云. 军事医学科学院院刊. 2009(06)
[3]蛋鸡中发现J亚群白血病与网状内皮增生症自然混合感染[J]. 成子强,张玲娟,刘杰,刘思当,赵振华,张利,崔治中. 中国兽医学报. 2006(06)
[4]Evolution of gp85 gene of subgroup J avian leukosis virus under the selective pressure of antibodies[J]. WANG Zhengfu & CUI Zhizhong College of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Agricultural University, Taian 271018, China. Science in China（Series C:Life Sciences）. 2006(03)
[5]中国麻鸡中发现禽J亚群白血病[J]. 成子强,张利,刘思当,张玲娟,崔治中. 微生物学报. 2005(04)
[6]NHE基因研究进展[J]. 滕小春,刘海峰. 肿瘤防治研究. 2005(03)
[7]禽白血病病毒J亚群内蒙株的分离与鉴定[J]. 杨玉莹,叶建强,赵振华,秦爱建,顾玉芳. 中国病毒学. 2003(05)
[8]间接荧光抗体法快速诊断海兰褐蛋鸡J亚群禽白血病的研究[J]. 徐镔蕊,董卫星,何召庆,冯小宇,余春明,张丽,任艳丽,L F LEE,Mao-xiang LI. 中国兽医杂志. 2002(09)
[9]商品代肉鸡J亚群禽白血病的病理及病毒分离鉴定[J]. 张志,崔治中,赵宏坤,王海蓉,许益明. 中国兽医杂志. 2002(06)
[10]我国鸡群中免疫抑制性病毒多重感染的诊断和对策[J]. 崔治中. 动物科学与动物医学. 2001(04)
博士论文
[1]J亚群禽白血病病毒Env蛋白分子生物学特性研究[D]. 叶建强.扬州大学 2005
本文编号：2986666
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