IL-17A对山羊乳腺上皮细胞分泌免疫防御因子功能的影响

发布时间：2021-01-19 13:29

　　白细胞介素17（interleukin-17,IL-17）是Th17细胞的特征性细胞因子,被认为是一种关键的炎性细胞因子,在宿主抵抗胞外菌、真菌感染,以及炎症、超敏反应、自身免疫性疾病等多种疾病的病程中起到了重要的作用。为研究IL-17A对山羊乳腺上皮细胞免疫防御功能的影响,本研究根据GenBank公布的奶山羊IL-17A完全CDS区序列设计了真核表达引物,从Con A活化的奶山羊外周血单个核细胞（PBMCs）中提取总RNA,反转录PCR法扩增目的序列。扩增出的目的片段连接于真核表达载体pEGFP-N1,并转入大肠杆菌Trans5α感受态细胞保存,将鉴定正确的重组质粒命名为IL-17A-pEGFP-N1。将重组质粒转染入HEK293T细胞进行瞬时表达,收取真核表达上清作为刺激物。选取成年健康奶山羊,通过组织块贴壁法制备原代山羊乳腺上皮细胞（GMEC）。用IL-17A真核表达上清（终质量浓度:15 mg/L）刺激山羊乳腺上皮细胞,通过Real-time PCR方法检测GMEC分泌的各种促炎性细胞因子、趋化因子以及防御性蛋白表达水平的变化。结果表明,IL-17A可以促进山羊乳腺上皮原代细胞... 

【文章来源】：中国兽医学报. 2020,40(11)北大核心

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 动物、细胞、菌株及载体
    1.2 试剂
    1.3 山羊IL-17A真核表达载体的构建
    1.4 山羊IL-17A的真核表达
    1.5 原代山羊乳腺上皮细胞的制备
    1.6 IL-17A体外刺激山羊乳腺上皮细胞
    1.7 促炎性细胞因子和免疫防御相关因子mRNA表达水平变化
2 结果
    2.1 山羊IL-17A真核表达载体的构建
    2.2 山羊IL-17A的真核表达
    2.3 原代山羊乳腺上皮细胞的制备
    2.4 IL-17A对山羊乳腺上皮细胞分泌促炎性细胞因子和免疫防御相关因子mRNA表达水平的影响
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]奶山羊乳腺上皮细胞的分离、培养及鉴定[J]. 王桢,罗军,王伟,赵旺生,林先滋.  生物工程学报. 2010(08)



本文编号：2987079