重组产气荚膜梭菌β毒素突变体的表达与免疫保护性分析

发布时间：2021-01-19 15:12

　　旨在获得产气荚膜梭菌β毒素（CPB）的重组突变体,并评价其毒力及免疫保护性。对已知的产气荚膜梭菌CPB编码基因进行优化设计,同时引入4个氨基酸突变位点,分别是第212位的精氨酸突变为谷氨酸,第268位的亮氨酸突变为甘氨酸,266位的酪氨酸和275位的色氨酸突变为丙氨酸。此外,在该基因5′端添加Th细胞表位（T）和鞭毛蛋白（flagellin）N末端的编码序列,经人工合成获得重组基因片段(GTF_NCPB_m4)。将GTF_NCPB_m4克隆至原核表达载体pET-30a （+）中进行表达与纯化,获得重组蛋白rTF_NCPB_m4。利用Western blot方法检测rTF_NCPB_m4与C型产气荚膜梭菌毒素抗血清的反应性,并检测rTF_NCPB_m4对小鼠的毒力。随后,以rTF_NCPB_m4免疫家兔,按照《中华人民共和国兽药典》（2015年版）规定... 

【文章来源】：畜牧兽医学报. 2020,51(11)北大核心

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

重组原核表达质粒pTFNCPBm4的酶切鉴定

SDS-PAGE和Western blot检测结果显示,在15和37 ℃的诱导条件下,rTFNCPBm4均主要以包涵体的形式表达(图2a),相对分子质量约为49 ku,且能与抗His标签抗体发生反应(图2b)。综合诱导时间,确定rTFNCPBm4的最适诱导表达条件为37 ℃, 诱导4 h。2.3 rTFNCPBm4的纯化与鉴定

rTFNCPBm4的纯化

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：2987222