乙型脑炎病毒NS1和NS1-2A蛋白的真核表达及其差异性研究

发布时间：2021-01-21 02:17

　　为深入研究乙型脑炎病毒（JEV）NS1和NS1-2A蛋白的表达和免疫效果差异,本试验构建并扩增C-端含Flag标签的NS1和NS1-2A基因,利用T4 DNA连接酶分别连接到质粒pcDNA3.1（+）上,构建重组质粒pcDNA3.1-NS1-Flag和pcDNA3.1-NS1-2A-Flag。将这两种真核表达质粒分别转染BHK-21细胞,利用RT-PCR、IFA和Western blotting检测NS1和NS1-2A蛋白在体外的表达情况,用pcDNA3.1-NS1-Flag、pcDNA3.1-NS1-2A-Flag和pcDNA3.1（+）免疫BALB/c小鼠,检测这两种蛋白在体内的表达差异。结果显示,试验成功构建了NS1和NS1-2A基因的真核表达载体pcDNA3.1-NS1-Flag和pcDNA3.1-NS1-2A-Flag,IFA和Western blotting鉴定NS1和NS1-2A蛋白成功表达,重组质粒pcDNA3.1-NS1-Flag和pcDNA3.1-NS1-2A-Flag免疫小鼠后可诱发机体产生特异性体液免疫,pcDNA3.1-NS1-2A-Flag联合免疫组小鼠血清... 

【文章来源】：中国畜牧兽医. 2020,47(07)北大核心

【文章页数】：10 页

【部分图文】：

NS1-2A-Flag和NS1-Flag PCR扩增结果

重组质粒pcDNA3.1-NS1-2A-Flag和pcDNA3.1-NS1-Flag的双酶切鉴定结果

NS1-Flag和NS1-2A-Flag融合蛋白在BHK-21细胞中表达,大小分别约为48.7和66.4 ku(图5),Western blotting结果与预期结果相符,同NS1-2A-Flag具有较好的反应原性。图4 间接免疫荧光法检测NS1、NS1-2A蛋白在BHK-21细胞中的表达(100×)

【参考文献】：
期刊论文
[1]我国流行性乙型脑炎研究近况[J]. 蔡宝祥.  畜牧与兽医. 2012(07)
[2]登革病毒2型NS1蛋白DNA疫苗的构建及其免疫效果观察[J]. 江丽芳,高阳,方丹云,周俊梅.  中华微生物学和免疫学杂志. 2003(10)



本文编号：2990252