TSC2基因调控山羊骨骼肌细胞增殖的分子机制研究

发布时间：2021-01-22 00:16

　　肿瘤抑制因子TSC2（tuberin）是mTOR信号通路上游的负调节因子,具有GTPase激活蛋白（GTPase-activating protein,GAP）活性,调节着细胞内DNA的转录和蛋白质的合成;研究表明,TSC2能够作为细胞内的一种汇集多种信号的中心,在调节细胞增殖、分化、凋亡及胚胎发育等生理过程中发挥着重要的作用。然而,目前TSC2基因调控骨骼肌生长发育的分子机制尚不明确。通过研究TSC2基因调控山羊成肌细胞增殖的分子机理,对调控动物骨骼肌生长发育具有重要的理论意义和研究价值。本研究以分离纯化后的奶山羊骨骼肌成肌细胞为试验材料,克隆获得了山羊TSC2基因的编码区;通过过表达和干扰技术研究TSC2基因对成肌细胞增殖的作用;通过RT-qPCR和Western Blot等方法,分析TSC2基因过表达和干扰后对mTOR信号通路相关基因表达和成肌细胞增殖的影响。该研究获得了如下主要结果:1.山羊成肌细胞分离与鉴定以奶山羊羔羊半腱肌组织为试验材料,依次利用I型胶原酶和胰蛋白酶消化肌肉组织,利用差速贴壁法纯化,最终得到成肌细胞。利用RT-PCR和免疫荧光染色法对分离纯化后的成肌细胞进行... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：96 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

骨骼肌发育过程示意图(Bentzingeretal.2012)

TSC1/2复合体(Crinoetal.2010)

图 1-4 mTOR分子结构(Laplante et al. 2012)Figure 1-4 mTOR molecular structure已经证实，mTOR 对胰岛素/IGF-1 和氨基酸信号通路的整合作用可能蛋白质合成调控中起重要作用(A Suryawan et al. 2010)。一方面，mTO醇 3-激酶（phosphatidylinositide 3-kinases，PI3K）/蛋白激酶 B（PKB）通路对生长因子做出响应。胰岛素和胰岛素样生长因子 1（I体的结合可引起胰岛素受体底物（insulin receptor substrate，IRS）的结随后的 PI3K 的结合。PI3K 与 IRS 的结合促进细胞膜上磷脂酰肌醇hatidylinositol 4,5-bisphosphate, PIP2） 转 化 为 磷 脂 酰 肌 醇 三atidylinositol 3,4,5-triphosphate, PIP3），该过程被同源性磷酸酶-张atase and tensin homolog deleted on chromosome ten，PTEN）抑制。PIP酸肌醇依赖的激酶 1（3-phosphoinositide-dependent protein kinase-1，P细胞膜上的结合，导致 PDK1 对 Akt 的磷酸化和激活(Mendoza et al. 2


本文编号：2992161