PCV2b衣壳蛋白C端连接不同B细胞表位对其免疫原性的影响

发布时间：2021-01-22 13:28

　　为了研制廉价高效的猪圆环病毒2型（PCV2）亚单位疫苗,根据大肠杆菌密码子的偏好性合成PCV2b（GenBank:AY969004.1）cap基因全序列,利用PCR技术,分别将PCV2的2个B细胞表位(²²⁶LKDPPLNP²³³和¹⁹⁵HVGLGTAF²⁰²)以单独和串联的方式连接到Cap的C端,成功构建至pE-SUMO表达载体,将3个重组载体转化表达菌株BL21（DE3）后诱导表达,经SDS-PAGE分析和Western Blotting鉴定,3种重组蛋白均以可溶形式表达且表达正确。对3种重组蛋白分别进行镍柱亲和层析纯化,再用SUMO蛋白酶除去融合标签,获得无标签的Cap-e1、Cap-e2和Cap-e12蛋白,并分别与相应的弗氏佐剂等体积乳化,将20只6周龄大小的雌性Balb/c小鼠随机分成5组,分别免疫3种重组蛋白,同时设置疫苗组和PBS组作为对照组,并进行免疫评价,比较C末端连接的不同B细胞表位对Cap免疫原性的影响。抗体检测结果表明,除第2周外,各试验组的抗体水平均显著高于PBS组,且连... 

【文章来源】：华北农学报. 2020,35(03)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

菌液PCR鉴定

按照SUMO蛋白酶说明书推荐的缓冲条件,3种重组蛋白均在4 ℃酶切过夜,Ni-NTA亲和层析纯化除标签,经SDS-PAGE(图5-A)鉴定表明,在目的条带大小处有对应条带出现,证明3种重组蛋白均被成功切开,获得Cap-e1、Cap-e2和Cap-e12目的蛋白。Western Blotting(图5-B)结果表明,3种重组蛋白均与PCV2的Cap单抗3H6发生特异免疫反应。2.6 抗体测定

用PCV2抗体检测试剂盒检测血清抗体,图6结果表明,在整个试验过程中,除PBS组外,其他试验组和疫苗组一样,均能刺激机体持续产生针对Cap的抗体,在第2周时(图6-A),Cap-e2组几乎没有与Cap特异反应的抗体,Cap-e1组和Cap-e12组产生的抗体水平很低,疫苗组产生的抗体略高于试验组。在第4周时(图6-B),除PBS组外,其他组与Cap特异反应的抗体均有大幅度提升,其中疫苗组显著高于其他组,Cap-e12组显著高于Cap-e1组和Cap-e2组,Cap-e2组也显著高于Cap-e1组。在第6周时(图6-C),抗体滴度持续上升,Cap-e12组同样显著高于Cap-e1组和Cap-e2组,Cap-e2组同样显著高于Cap-e1组,而疫苗组和Cap-e12无显著差异。3 结论与讨论

【参考文献】：
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本文编号：2993309