猪圆环病毒3型重组质粒的构建与遗传进化分析
发布时间:2021-01-23 14:16
猪圆环病毒3型(PCV3)是2015年发现的一个新型病毒,到目前为止PCV3在全球呈流行趋势,而患有繁殖障碍的母猪经常被该病毒感染,并且在患有某些疾病中可以检测的到该病毒,出现了共感染的现象。PCV3对全球的养猪产业造成了一定的经济损失,并且到目前为止PCV3无法在传代细胞中进行分离培养。为了减少PCV3对我国养猪产业造成的经济损失,并对其致病机理的研究提供支持,本研究利用河北株(GenBank登录号:MK105924)PCV3的全基因组序列构建感染性克隆,并将其转染到传代细胞中进行增殖。对河北株和全球的PCV3基因组进行序列分析,以进一步了解该病毒的结构特征、致病机理及其分布与地域之间的关系,为该病的防控提供理论基础。在华北地区采集到的病料中,发现了一株新的PCV3毒株。为了扩增这株新PCV3毒株的整个基因组序列,利用两对引物对其进行扩增,将所得到的产物进行基因组的序列测定后,获得了 PCV3的全基因组序列,并将其命名为河北株PCV3。对这一全基因组序列构建感染性克隆,获得了重组质粒,将构建的重组质粒转染到PK-15细胞中,并连续传15代。绘制了河北株的基因图谱,选取9株河北省PCV...
【文章来源】:河北农业大学河北省
【文章页数】:72 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
图1病变淋巴结的PCV3检测结果??Fig.?1?Detection?results?of?PCV3?in?diseased?lymph?nodes??
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【参考文献】:
期刊论文
[1]Molecular Epidemiology of Porcine Circovirus Type 3 Infection in Swine Herds in China[J]. Xiangdong Li,Chaolin Zhang,Mingming Qiao,Jiangsong Guo,Guangyuan Xing,Chunxia Jin,Juan Wang,Ming Sun,Kegong Tian. Virologica Sinica. 2018(04)
[2]不同接毒方法对猪圆环病毒2型增殖的影响[J]. 陈玉文. 福建畜牧兽医. 2017(04)
[3]断奶猪多系统衰弱综合征血清抗体检测[J]. 郎洪武,张广川,吴发权,张创贵. 中国兽医科技. 2000(03)
本文编号:2995366
【文章来源】:河北农业大学河北省
【文章页数】:72 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
图1病变淋巴结的PCV3检测结果??Fig.?1?Detection?results?of?PCV3?in?diseased?lymph?nodes??
?amplified??pair?of?primers;?2:?negative?control??fragment?of?the?first?pair?of?primers;?2:?negative?control??3.1.3感染性克隆阳性菌液的鉴定??为了检验白色菌落是否为阳性菌落,运用PCV3鉴定引物通过PCR对培养的两个阳性菌液进??行检测,电泳结果显示(阁3)在阳性尚液中检测到了?PCV3,证明PCV3感染性克隆构建成功。??M?1?2?3??418bp??I,??图3阳性菌液的PCR产物??Fig.?3?PCR?product?of?positive?bacteria?liquid???;i::?M:丨)丨.2000?DNA?Marker:?1:阳件菌液I;?2:阳性菌液2:?3:空白对照。??Note:?M?DL2000?DNA?Marker:?1?positive?bacterial?solution?1.2:?positive?bacterial?solution?1;?3:?blank?control.??23??
?河北农业大学硕士学位(毕业)论文???3.1.4?PCV3质粒的酶切鉴定??为了检验感染性克隆是否成功,利用Xhol内切酶对pcDNA3.]?(?+?)-PCV3进行酶切鉴定,??鉴定结果如图4。??M?1?2??12000bp???SOOObp-——pt秦瓣寻_;?:_觸??T〇^?.?h??4000bp?齡“??識屬趣々讀H??;?一一?'广??2000bp——;:iJ§!3;;^;??1500bp ̄;?]??_bp—隊?I??75〇bp—?rgr-??25。卜?Ei:?—」??图4酶切鉴定PCV3质粒??Fig.?4?PCV3?plasmid?identification?by?enzyme?digestion??注:M:?DL12000?DNAMarker;?1:?pcDNA3.1?(?+?)?-PCV3?被?Xhol?内切酶进行酶切:2:?pcDNA3.1?(?+?)?-PCV3〇??Note:?M:?DL2000?DNA?Marker;?I:?PcDNA3?1?(+)-PCV3?was?cleaved?by?Xhol?endonuclease;?2:?PcDNA3.1?(+)-PCV3.??3.1.5?PCV3河北株序列特征分析??为了进一步的了解PCV3河北株(GenBank登录号:MK105924)基因序列的特征,绘制了??基因图谱(图5)并对其进行分析。从图中我们可以看到有3个开放阅读框(ORFs),分别为??ORF1、0RF2和0RF3,每个开放阅读框编码的蛋白质都大于200个氨基酸,0RF1和ORF2的??编码方向相反,而ORF]和ORF3的编码方向相同
【参考文献】:
期刊论文
[1]Molecular Epidemiology of Porcine Circovirus Type 3 Infection in Swine Herds in China[J]. Xiangdong Li,Chaolin Zhang,Mingming Qiao,Jiangsong Guo,Guangyuan Xing,Chunxia Jin,Juan Wang,Ming Sun,Kegong Tian. Virologica Sinica. 2018(04)
[2]不同接毒方法对猪圆环病毒2型增殖的影响[J]. 陈玉文. 福建畜牧兽医. 2017(04)
[3]断奶猪多系统衰弱综合征血清抗体检测[J]. 郎洪武,张广川,吴发权,张创贵. 中国兽医科技. 2000(03)
本文编号:2995366
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