金黄色葡萄球菌诱导奶牛中性粒细胞凋亡的基因表达研究

发布时间：2021-01-23 17:52

　　奶牛乳腺炎是世界范围内影响奶牛业最大的疾病。在众多能引起奶牛乳腺炎的病原中,S.aureus是危害最大的。由于抗生素的滥用和疫苗等生物制品的不健全导致乳腺炎的防治非常困难,而根本的原因还在于现阶段人们对S.aureus乳腺炎的感染损伤机制还不清楚,因此探索S.aureus乳腺炎发生、发展与转归的分子机制迫在眉睫。中性粒细胞是奶牛乳腺抵御病原菌侵袭的第一道防线,它的凋亡对于控制乳腺炎症的发展和转归至关重要,在解除奶牛不良炎性反应中发挥重要作用。为了探索奶牛S.aureus乳腺炎发生时中性粒细胞凋亡的分子机制,找到调控中性粒细胞凋亡的相关基因,本实验在体外37℃,5%C02的条件下培养从奶牛外周血中分离到的中性粒细胞,向培养基中以50：1的比例加入处于对数生长期的S.aureus,分别在共培养Oh,2h,4h,6h,8h,10h后用PITC/PI双染法通过流式细胞术检测中性粒细胞凋亡情况。最后利用基因芯片技术筛选出与中性粒细胞凋亡相关的基因,并通过qPCR对芯片结果加以验证。实验所得结果有以下几个方面：1、中性粒细胞体外培养存活情况体外培养的中性粒细胞的活细胞比例随着培养时间的延长不断下降... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
1 文献综述
    前言
    1.1 奶牛S.aureus乳腺炎研究进展
        1.1.1 奶牛S.aureus乳腺炎的发病机制
        1.1.2 奶牛S.aureus乳腺炎的危害
        1.1.3 奶牛S.aureus乳腺炎的防治措施
    1.2 中性粒细胞凋亡与炎症修饰
        1.2.1 中性粒细胞的凋亡现象
        1.2.2 中性粒细胞凋亡的影响因素
        1.2.3 中性粒细胞凋亡的分子改变
        1.2.4 中性粒细胞凋亡的诱发通路
        1.2.5 中性粒细胞凋亡与存活的调节
        1.2.6 中性粒细胞凋亡与炎症反应
        1.2.7 中性粒细胞凋亡与S.aureus乳腺炎的关系
    1.3 基因芯片技术的研究进展
        1.3.1 基因芯片技术的原理
        1.3.2 基因芯片的主要类型
        1.3.3 基因芯片技术的主要步骤
        1.3.4 基因芯片技术的特点
        1.3.5 基因芯片技术的应用
2 目的与意义
3 材料与方法
    3.1 实验材料
        3.1.1 菌种及实验动物
        3.1.2 细胞
        3.1.3 培养基
        3.1.4 细胞提取试剂盒
        3.1.5 荧光定量PCR相关引物
        3.1.6 主要试剂
        3.1.7 主要仪器
    3.2 标准菌株的培养与计数
    3.3 中性粒细胞的提取、培养与鉴定
        3.3.1 中性粒细胞的提取
        3.3.2 中性粒细胞的培养
        3.3.3 中性粒细胞的计数
        3.3.4 中性粒细胞的鉴定
        3.3.5 中性粒细胞的存活曲线测定
    3.4 中性粒细胞的细菌感染实验
    3.5 中性粒细胞凋亡的检测
    3.6 S.aureus诱导中性粒细胞凋亡的基因表达谱测定
    3.7 芯片结果实时荧光定量PCR（qPCR）验证
        3.7.1 细胞RNA的提取
        3.7.2 RNA的纯化
        3.7.3 基因组DNA的除去反应
        3.7.4 cDNA的合成反应
        3.7.5 SYBR Green实时荧光定量PCR
        3.7.6 相对mRNA表达水平的计算
4 结果与分析
    4.1 中性粒细胞的鉴定结果
    4.2 中性粒细胞的存活曲线
    4.3 S.aureus诱导中性粒细胞凋亡情况
    4.4 样品RNA质量检测结果
    4.5 基因芯片结果
    4.6 qPCR验证结果
5 讨论
    5.1 中性粒细胞的培养
    5.2 中性粒细胞的凋亡与细菌感染
    5.3 S.aureus诱导中性粒细胞凋亡的相关基因表达情况
        5.3.1 Bcl-2基因
        5.3.2 IL1
6 结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]浅谈奶牛乳腺炎的防控措施[J]. 朱兴贵.  上海畜牧兽医通讯. 2012(05)
[2]奶牛乳腺炎的预防措施[J]. 周洪君,周庆民.  畜牧兽医科技信息. 2012(09)
[3]奶牛乳腺炎的病因分析及防治措施[J]. 周崇平.  养殖技术顾问. 2012(02)
[4]奶牛乳腺炎的综合防治[J]. 田崇刚.  农业技术与装备. 2011(11)
[5]奶牛乳腺炎的诊断与防治[J]. 韩晓玲,赵长志.  养殖技术顾问. 2011(04)
[6]奶牛乳腺炎的发生及综合性防治[J]. 赵秀伟,王维.  黑龙江动物繁殖. 2011(02)
[7]奶牛乳腺炎防治方法的研究进展[J]. 朱文娟,邓干臻.  北方牧业. 2008(09)
[8]湖北地区奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定与耐药性分析[J]. 刘朝,王京仁,张成栋,吴波,韩永佩,赵波,余亚军,王建华,刘友斌,程贵宝,冯哲,田地,陈焕春,郭爱珍.  中国奶牛. 2007(07)
[9]奶牛乳腺炎的研究进展[J]. 方振华,高腾云,丁利.  上海畜牧兽医通讯. 2007(02)
[10]奶牛乳腺炎研究进展[J]. 曹访,唐修君,陈丽,王杏龙.  黑龙江动物繁殖. 2006(04)



本文编号：2995652