东方巴贝斯虫3个免疫相关基因的克隆表达
发布时间：2021-01-25 14:49
东方巴贝斯虫（Babesia orientalis）是一种寄生于水牛红细胞内,由镰形扇头蜱经卵传播的血液原虫,只引起水牛巴贝斯虫病。该病主要分布在中国长江以南,主要临床症状为发热、贫血、黄疸、血红蛋白尿,严重时导致死亡,给我国水牛养殖业带来了巨大损失。尽管对东方巴贝斯虫的体外培养、形态学、传播媒介、分子分类学和诊断方法等有了一定的认识,但对其入侵机制还不了解,缺乏有效的抗原用于免疫诊断和预防。本研究在建立了东方巴贝斯虫cDNA文库的基础上,通过免疫筛选挑选3个可能与免疫相关的基因,对其进行生物信息学分析,原核或真核表达及免疫原性研究。（1）B. orientalis cDNA文库的免疫筛选用东方巴贝斯虫阳性的水牛血清对东方巴贝斯虫裂殖子cDNA文库进行免疫筛选,挑选其中3个可能与免疫相关的基因：BoP34、BoP21和AMA1,对其进行克隆测序和生物信息学分析。BoP34基因的核苷酸序列全长为1088bp,包含两个开放阅读框（ORF）,编码251个氨基酸,蛋白分子量约为34kDa。BLAST分析表明,BoP34与牛巴贝斯虫核移动蛋白（XM001611335）核苷酸序列的相似性为72%,...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表
1 文献综述
1.1 巴贝斯虫入侵相关蛋白
1.1.1 引言
1.1.2 贝斯虫入侵宿主细胞的过程
1.1.3 巴贝斯虫入侵相关抗原分子
1.2 免疫机制
1.2.1 非特异性免疫
1.2.2 特异性免疫
2 研究目的意义
3 材料与方法
3.1 试验材料
3.1.1 虫株、血清和试验动物
3.1.2 菌种与质粒
3.1.3 酶及主要试剂
3.1.4 主要溶液的配制
3.1.5 主要仪器和设备
3.2 试验方法
3.2.1 生物信息学分析网站及软件
3.2.2 cDNA文库的免疫筛选
3.2.3 引物的设计与合成
3.2.4 DNA模板的提取及DNA回收
3.2.5 免疫相关基因的克隆
3.2.6 原核表达及免疫特性研究
3.2.7 AMA1基因的真核表达
4 结果分析
4.1 免疫相关基因的筛选
4.2 免疫相关基因的克隆分析
4.2.1 免疫相关基因的PCR扩增
4.2.2 免疫相关基因重组质粒的鉴定
4.2.3 免疫相关基因的序列测定
4.2.4 BoP34基因的生物信息学分析
4.2.5 BoP21基因的生物信息学分析
4.2.6 AMA1基因的生物信息学分析
4.3 免疫相关基因的原核表达、蛋白纯化及免疫特性研究
4.3.1 免疫相关基因原核表达质粒的鉴定
4.3.2 免疫相关基因的原核表达
4.3.3 ELISA测定多克隆抗血清效价
4.3.4 Western blot检测重组蛋白的免疫反应原性
4.3.5 Western blot确定东方巴贝斯虫中的3种免疫相关蛋白
4.4 AMA1的真核表达
4.4.1 AMA1截短序列的PCR扩增
4.4.2 重组质粒的鉴定
4.4.3 AMA1截短序列的真核表达与分析
5 讨论
5.1 cDNA文库的筛选及其生物信息学分析
5.2 免疫相关基因的原核表达及免疫反应原性
5.3 免疫相关蛋白多克隆抗体的制备及免疫反应原性
5.4 AMA1基因的真核表达分析
6 结论
参考文献
致谢
附录
【参考文献】：
期刊论文
[1]东方巴贝斯虫核糖体蛋白L26全长cDNA克隆及蛋白特性分析[J]. 刘琴,周丹娜,张颖,贺兰,周艳琴,赵俊龙. 中国血吸虫病防治杂志. 2009(02)
[2]东方巴贝斯虫的18S rRNA基因的扩增及系统发育研究[J]. 刘琴,付媛,周艳琴,周丹娜,江涛,王金苹,赵俊龙,姚宝安. 畜牧兽医学报. 2005(09)
[3]东方巴贝斯虫分泌性抗原的免疫保护作用研究[J]. 赵俊龙,刘钟灵,姚宝安,马丽华,刘恩勇,丁明星,张德明,任宪武,彭伏虎,钟龙群. 畜牧兽医学报. 2000(02)
[4]寄生于中国水牛Bubalus Vbubalis的巴贝斯虫一新种（梨形虫目:巴贝斯科）[J]. 刘钟灵,赵俊龙,马丽华,姚宝安. 畜牧兽医学报. 1997(01)
[5]湖北省水牛巴贝斯焦虫病调查研究——Ⅱ.实验感染证实镰形扇头蜱是牛巴贝斯焦虫和双芽巴贝斯焦虫的传播者[J]. 刘钟灵,马丽华,高新山,程新阶,杨待建,王生裕. 畜牧兽医学报. 1987(03)
[6]湖北省水牛巴贝斯焦虫病调查研究[J]. 刘钟灵,张光第,马丽华,黄继荪,陈新阶,高新山,杨待建. 畜牧兽医学报. 1986(01)
[7]双芽巴贝斯焦虫和牛巴贝斯焦虫混合寄生水牛病例报导[J]. 陈守仁,杨峻,韩昌全,李汉民,吴海峰. 湖北畜牧兽医. 1984(04)
博士论文
[1]东方巴贝斯虫新型诊断方法的建立和基因组序列测定与分析[D]. 贺兰.华中农业大学 2011
[2]东方巴贝斯虫cDNA文库构建及其应用[D]. 刘琴.华中农业大学 2007
本文编号：2999412
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表
1 文献综述
1.1 巴贝斯虫入侵相关蛋白
1.1.1 引言
1.1.2 贝斯虫入侵宿主细胞的过程
1.1.3 巴贝斯虫入侵相关抗原分子
1.2 免疫机制
1.2.1 非特异性免疫
1.2.2 特异性免疫
2 研究目的意义
3 材料与方法
3.1 试验材料
3.1.1 虫株、血清和试验动物
3.1.2 菌种与质粒
3.1.3 酶及主要试剂
3.1.4 主要溶液的配制
3.1.5 主要仪器和设备
3.2 试验方法
3.2.1 生物信息学分析网站及软件
3.2.2 cDNA文库的免疫筛选
3.2.3 引物的设计与合成
3.2.4 DNA模板的提取及DNA回收
3.2.5 免疫相关基因的克隆
3.2.6 原核表达及免疫特性研究
3.2.7 AMA1基因的真核表达
4 结果分析
4.1 免疫相关基因的筛选
4.2 免疫相关基因的克隆分析
4.2.1 免疫相关基因的PCR扩增
4.2.2 免疫相关基因重组质粒的鉴定
4.2.3 免疫相关基因的序列测定
4.2.4 BoP34基因的生物信息学分析
4.2.5 BoP21基因的生物信息学分析
4.2.6 AMA1基因的生物信息学分析
4.3 免疫相关基因的原核表达、蛋白纯化及免疫特性研究
4.3.1 免疫相关基因原核表达质粒的鉴定
4.3.2 免疫相关基因的原核表达
4.3.3 ELISA测定多克隆抗血清效价
4.3.4 Western blot检测重组蛋白的免疫反应原性
4.3.5 Western blot确定东方巴贝斯虫中的3种免疫相关蛋白
4.4 AMA1的真核表达
4.4.1 AMA1截短序列的PCR扩增
4.4.2 重组质粒的鉴定
4.4.3 AMA1截短序列的真核表达与分析
5 讨论
5.1 cDNA文库的筛选及其生物信息学分析
5.2 免疫相关基因的原核表达及免疫反应原性
5.3 免疫相关蛋白多克隆抗体的制备及免疫反应原性
5.4 AMA1基因的真核表达分析
6 结论
参考文献
致谢
附录
【参考文献】：
期刊论文
[1]东方巴贝斯虫核糖体蛋白L26全长cDNA克隆及蛋白特性分析[J]. 刘琴,周丹娜,张颖,贺兰,周艳琴,赵俊龙. 中国血吸虫病防治杂志. 2009(02)
[2]东方巴贝斯虫的18S rRNA基因的扩增及系统发育研究[J]. 刘琴,付媛,周艳琴,周丹娜,江涛,王金苹,赵俊龙,姚宝安. 畜牧兽医学报. 2005(09)
[3]东方巴贝斯虫分泌性抗原的免疫保护作用研究[J]. 赵俊龙,刘钟灵,姚宝安,马丽华,刘恩勇,丁明星,张德明,任宪武,彭伏虎,钟龙群. 畜牧兽医学报. 2000(02)
[4]寄生于中国水牛Bubalus Vbubalis的巴贝斯虫一新种（梨形虫目:巴贝斯科）[J]. 刘钟灵,赵俊龙,马丽华,姚宝安. 畜牧兽医学报. 1997(01)
[5]湖北省水牛巴贝斯焦虫病调查研究——Ⅱ.实验感染证实镰形扇头蜱是牛巴贝斯焦虫和双芽巴贝斯焦虫的传播者[J]. 刘钟灵,马丽华,高新山,程新阶,杨待建,王生裕. 畜牧兽医学报. 1987(03)
[6]湖北省水牛巴贝斯焦虫病调查研究[J]. 刘钟灵,张光第,马丽华,黄继荪,陈新阶,高新山,杨待建. 畜牧兽医学报. 1986(01)
[7]双芽巴贝斯焦虫和牛巴贝斯焦虫混合寄生水牛病例报导[J]. 陈守仁,杨峻,韩昌全,李汉民,吴海峰. 湖北畜牧兽医. 1984(04)
博士论文
[1]东方巴贝斯虫新型诊断方法的建立和基因组序列测定与分析[D]. 贺兰.华中农业大学 2011
[2]东方巴贝斯虫cDNA文库构建及其应用[D]. 刘琴.华中农业大学 2007
本文编号：2999412
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