猪δ冠状病毒重组M蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立与应用
发布时间：2021-01-26 03:15
本研究旨在建立一种可靠的检测猪δ冠状病毒（porcine deltacoronavirus,PDCoV） IgG抗体的间接ELISA方法,了解四川地区PDCoV的流行情况。采用原核表达系统表达PDCoV膜蛋白（M）作为检测抗原,通过反应条件的优化,建立了基于PDCoV M蛋白的间接ELISA方法,命名为PDCoV-rM-ELISA,并用该方法对430份临床样品进行检测。成功构建了重组表达菌BL21-pET-32a-M,经诱导表达后获得了重组M蛋白,Western bolt检测表明,重组蛋白具有良好的反应原性。以其作为包被抗原建立的PDCoV-rM-ELISA方法仅对PDCoV血清检测为阳性,与猪流行性腹泻病毒等5种猪常见病原阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性;该方法灵敏性高、重复性好,批间和批内重复性变异系数均小于10%;与成品化PDCoV抗体检测试剂盒同时检测48份临床血清,两种方法的阳性符合率为88.46%,阴性符合率为90.91%,总符合率为89.58%。临床样品检测结果表明,各地样本PDCoV抗体阳性率平均为11.86%,且统计学分析显示,母猪比仔猪和育肥猪高2.25倍的P...
【文章来源】：畜牧兽医学报. 2020,51(07)北大核心
【文章页数】：9 页
【部分图文】：
重组M蛋白的SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定
表6 不同类型猪的抗体阳性数和符合率Table 6 The number of positive antibodies and coincidence rate of different types of pigs 类型Types 阳性Positive 阴性Negative 符合率/%Coincidence rate 仔猪Piglet 7 9 87.82 育肥猪Nursery pig 6 10 93.26 母猪Sow 12 4 92.30 这里的符合率是和PDCoV商品化试剂盒进行比较The coincidence rate is compared with the N-ELISA kit in here图3 四川地区PDCoV抗体阳性率分布图
图2 临床血清样品检测结果表7 PDCoV感染的可能危险因素的逻辑回归模型分析Table 7 Analysis of logistic regression models of possible risk factors associated with the PDCoV infection 变量Variables 比值比OR 95%置信区间95% CI P值P-value 年份 Years 2018 1 ref 0.187 2019 1.480 0.826～2.668 发育阶段Life cycle of swine 仔猪+育肥猪 Piglets + nursery pigs 1 ref 0.011 母猪 Sows 2.248 1.200～4.215 ref代表参照ref represent references
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于猪丁型冠状病毒重组S1蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立与应用[J]. 侯林杉,贾敬亮,顾文源,刘宝京,师乾凯,袁广富,陈少杰,范京惠,左玉柱. 畜牧兽医学报. 2019(08)
[2]2017年～2018年四川省猪δ冠状病毒的检测与遗传进化分析[J]. 冯宇,殷鑫欢,徐雷,杨晓宇,鲁令华,徐志文,朱玲. 中国预防兽医学报. 2019(10)
[3]猪δ冠状病毒N蛋白的原核表达和间接ELISA检测方法的建立[J]. 闫瑞杰,张云飞,刘玲玲,张红垒,王亚宾,胡慧. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2019(10)
[4]猪丁型冠状病毒S1基因的克隆、原核表达及多克隆抗体制备[J]. 李成,张雨迪,黄小波,刘浩宇,刘志鹏,赵玉佳,曹三杰,文心田,文翼平,赵勤,伍锐. 畜牧兽医学报. 2018(06)
[5]猪丁型冠状病毒重组N蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立[J]. 逄凤娇,俞正玉,何孔旺,徐向伟,张柏猛,郭容利,温立斌,袁万哲,姜平,李彬. 中国预防兽医学报. 2017(06)
本文编号：3000367
【文章来源】：畜牧兽医学报. 2020,51(07)北大核心
【文章页数】：9 页
【部分图文】：
重组M蛋白的SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定
表6 不同类型猪的抗体阳性数和符合率Table 6 The number of positive antibodies and coincidence rate of different types of pigs 类型Types 阳性Positive 阴性Negative 符合率/%Coincidence rate 仔猪Piglet 7 9 87.82 育肥猪Nursery pig 6 10 93.26 母猪Sow 12 4 92.30 这里的符合率是和PDCoV商品化试剂盒进行比较The coincidence rate is compared with the N-ELISA kit in here图3 四川地区PDCoV抗体阳性率分布图
图2 临床血清样品检测结果表7 PDCoV感染的可能危险因素的逻辑回归模型分析Table 7 Analysis of logistic regression models of possible risk factors associated with the PDCoV infection 变量Variables 比值比OR 95%置信区间95% CI P值P-value 年份 Years 2018 1 ref 0.187 2019 1.480 0.826～2.668 发育阶段Life cycle of swine 仔猪+育肥猪 Piglets + nursery pigs 1 ref 0.011 母猪 Sows 2.248 1.200～4.215 ref代表参照ref represent references
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于猪丁型冠状病毒重组S1蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立与应用[J]. 侯林杉,贾敬亮,顾文源,刘宝京,师乾凯,袁广富,陈少杰,范京惠,左玉柱. 畜牧兽医学报. 2019(08)
[2]2017年～2018年四川省猪δ冠状病毒的检测与遗传进化分析[J]. 冯宇,殷鑫欢,徐雷,杨晓宇,鲁令华,徐志文,朱玲. 中国预防兽医学报. 2019(10)
[3]猪δ冠状病毒N蛋白的原核表达和间接ELISA检测方法的建立[J]. 闫瑞杰,张云飞,刘玲玲,张红垒,王亚宾,胡慧. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2019(10)
[4]猪丁型冠状病毒S1基因的克隆、原核表达及多克隆抗体制备[J]. 李成,张雨迪,黄小波,刘浩宇,刘志鹏,赵玉佳,曹三杰,文心田,文翼平,赵勤,伍锐. 畜牧兽医学报. 2018(06)
[5]猪丁型冠状病毒重组N蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立[J]. 逄凤娇,俞正玉,何孔旺,徐向伟,张柏猛,郭容利,温立斌,袁万哲,姜平,李彬. 中国预防兽医学报. 2017(06)
本文编号：3000367
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