布鲁菌Omp19基因的原核表达及其抗体的制备
发布时间：2021-01-26 17:08
布鲁菌病是由布鲁菌引起的一种人畜共患传染病，给人类的生命健康和畜牧业生产发展造成极大的危害，是目前世界上最严重的公共卫生问题之一。布鲁菌外膜蛋白高度保守，且具有免疫原性和免疫保护作用，对布鲁菌病的防控具有重大意义。本研究以布鲁菌Omp19基因为对象，对其进行原核表达并制备单克隆抗体，以期为该病的发病机制和检测研究奠定基础。根据GenBank上发表的布鲁菌外膜蛋白Omp19的基因序列设计引物，以布鲁菌基因组DNA为模板，克隆了Omp19基因，将目的基因与表达载体pET-32a连接，构建了重组表达质粒pET32a-Omp19，将重组表达质粒转化入感受态细胞BL21，诱导表达出了布鲁菌外膜蛋白Omp19，通过镍柱亲和层析方法对其进行了纯化，将纯化的目的蛋白免疫Balb/c小鼠，当效价达到一定水平后，取其脾细胞与骨髓瘤细胞以一定的比例融合，用ELISA方法进行筛选以能分泌抗Omp19单克隆抗体的杂交瘤细胞。本研究结果为将来布鲁菌病高效、安全疫苗的研制和快速、准确检测方法的建立，以及细胞水平的疾病发生机理提供了必需的物质材料。
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PCR扩增目的片段1：Omp19(534bp)；M：DL5000DNAMarkerFig2-2PCRamplificationfragment
图 2-3 PCR 产物回收纯化1：Omp19（534bp）；M：DL5000 DNA MarkerFigure 2-3 Recovery and purification of the PCR product1：Omp19（534bp）；M：DL5000 DNA MarkerpMD18-T Simple 载体连接连接产物转化 DH5α 感受态细菌后，挑取单个菌落酶切，然后进行 1% 琼脂糖凝胶电泳，并用凝胶 bp 处分别出现一条特异性条带（如图 2-4），与布鲁8-T 的大小相符，表明目的片段与 pMD18-T Simp
图 2-4 连接到 T 载体的目的片段 bp)和 pMD18-T Simple 载体（2 692bp）； M ：250 bp DNAFigure 2-4 The Purpose fragment connected to T vector4 bp)&pMD18-T Simple 载体（2 692bp）； M ：250 bp DNA物测序正确的Omp19基因与pMD18-T的连接产物送南京金的序列与Genbeank中布鲁菌外膜蛋白Omp19基因标列与 Genbeank 中公布序列的同源性均为 99% 以上（白 Omp19 基因已经成功克隆。
【参考文献】：
期刊论文
[1]布鲁氏菌病的研究与防控进展[J]. 任洪林,卢士英,周玉,李兆辉,柳增善. 中国畜牧兽医. 2009(09)
[2]布鲁氏菌病国内研究进展[J]. 司瑞,徐志凯. 地方病通报. 2006(05)
[3]布鲁氏菌外膜蛋白OMP31基因的克隆、表达和免疫学特性的初步研究[J]. 陈瑶,骆利敏,李明. 热带医学杂志. 2006(02)
[4]布鲁氏菌DNA疫苗的发展:过去、现在和未来[J]. 曾政,邓小红. 国外医学(免疫学分册). 2005(03)
[5]三种血清学方法检测奶牛布鲁氏菌病的比较试验[J]. 孙耀贵,黄美生,程佳. 黑龙江畜牧兽医. 2005(01)
[6]布氏菌病研究进展[J]. 尚德秋. 中国地方病防治杂志. 2004(04)
[7]布鲁氏菌致病及免疫机制研究进展[J]. 柳建新,陈创夫,王远志. 动物医学进展. 2004(03)
[8]牛布氏杆菌病的检测与防制[J]. 渠慎伦,魏成斌,师为重. 河南农业科学. 2004(04)
[9]布鲁氏菌病感染与免疫研究近况(续前)[J]. 尚德秋. 中国地方病防治杂志. 2003(03)
[10]布鲁氏菌病再度肆虐及其原因[J]. 尚德秋. 中国地方病防治杂志. 2001(01)
硕士论文
[1]布鲁氏菌三个外膜脂蛋白的原核表达、纯化及免疫原性实验[D]. 马长胜.山东农业大学 2012
[2]布鲁菌的分离鉴定及OMP25基因的克隆[D]. 张彦婷.内蒙古农业大学 2009
[3]布鲁氏菌外膜蛋白Omp39和Omp14的原核表达及其免疫原性鉴定[D]. 李娜.河北农业大学 2008
本文编号：3001503
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PCR扩增目的片段1：Omp19(534bp)；M：DL5000DNAMarkerFig2-2PCRamplificationfragment
图 2-3 PCR 产物回收纯化1：Omp19（534bp）；M：DL5000 DNA MarkerFigure 2-3 Recovery and purification of the PCR product1：Omp19（534bp）；M：DL5000 DNA MarkerpMD18-T Simple 载体连接连接产物转化 DH5α 感受态细菌后，挑取单个菌落酶切，然后进行 1% 琼脂糖凝胶电泳，并用凝胶 bp 处分别出现一条特异性条带（如图 2-4），与布鲁8-T 的大小相符，表明目的片段与 pMD18-T Simp
图 2-4 连接到 T 载体的目的片段 bp)和 pMD18-T Simple 载体（2 692bp）； M ：250 bp DNAFigure 2-4 The Purpose fragment connected to T vector4 bp)&pMD18-T Simple 载体（2 692bp）； M ：250 bp DNA物测序正确的Omp19基因与pMD18-T的连接产物送南京金的序列与Genbeank中布鲁菌外膜蛋白Omp19基因标列与 Genbeank 中公布序列的同源性均为 99% 以上（白 Omp19 基因已经成功克隆。
【参考文献】：
期刊论文
[1]布鲁氏菌病的研究与防控进展[J]. 任洪林,卢士英,周玉,李兆辉,柳增善. 中国畜牧兽医. 2009(09)
[2]布鲁氏菌病国内研究进展[J]. 司瑞,徐志凯. 地方病通报. 2006(05)
[3]布鲁氏菌外膜蛋白OMP31基因的克隆、表达和免疫学特性的初步研究[J]. 陈瑶,骆利敏,李明. 热带医学杂志. 2006(02)
[4]布鲁氏菌DNA疫苗的发展:过去、现在和未来[J]. 曾政,邓小红. 国外医学(免疫学分册). 2005(03)
[5]三种血清学方法检测奶牛布鲁氏菌病的比较试验[J]. 孙耀贵,黄美生,程佳. 黑龙江畜牧兽医. 2005(01)
[6]布氏菌病研究进展[J]. 尚德秋. 中国地方病防治杂志. 2004(04)
[7]布鲁氏菌致病及免疫机制研究进展[J]. 柳建新,陈创夫,王远志. 动物医学进展. 2004(03)
[8]牛布氏杆菌病的检测与防制[J]. 渠慎伦,魏成斌,师为重. 河南农业科学. 2004(04)
[9]布鲁氏菌病感染与免疫研究近况(续前)[J]. 尚德秋. 中国地方病防治杂志. 2003(03)
[10]布鲁氏菌病再度肆虐及其原因[J]. 尚德秋. 中国地方病防治杂志. 2001(01)
硕士论文
[1]布鲁氏菌三个外膜脂蛋白的原核表达、纯化及免疫原性实验[D]. 马长胜.山东农业大学 2012
[2]布鲁菌的分离鉴定及OMP25基因的克隆[D]. 张彦婷.内蒙古农业大学 2009
[3]布鲁氏菌外膜蛋白Omp39和Omp14的原核表达及其免疫原性鉴定[D]. 李娜.河北农业大学 2008
本文编号：3001503
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