CNTN1基因沉默对犬乳腺肿瘤细胞系转移调控的影响

发布时间：2021-01-27 01:55

　　CNTN1基因是近年来新发现的与癌症发生发展有关的基因,早期的研究表明CNTN1基因和神经突触发生和发育有关,直到2006年Su等首次通过c DNA全基因序列分析发现,该基因与肺癌的侵袭和转移相关,至此关于CNTN1基因在肿瘤方面的作用才被研究者重视。目前为止,CNTN1基因在肿瘤方面的作用机制仍不清楚。因此,本实验使用犬乳腺肿瘤细胞CHMm作为实验材料研究CNTN1基因在犬乳腺肿瘤中转移与侵袭的作用机制。本实验委托吉玛公司设计CNTN1基因sh RNA质粒,使用脂质体2000瞬时转染方法将CNTN1 sh RNA质粒导入犬乳腺肿瘤细胞系CHMm细胞。采用CCK-8和细胞平板克隆实验检测细胞增殖情况,Annexin V-ACP/7-AAD凋亡试剂盒检测细胞凋亡能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测Akt信号通路相关蛋白水平变化,探讨CNTN1基因沉默后对犬乳腺肿瘤CHMm细胞及Akt信号通路相关蛋白影响。结果:1、荧光显微镜下可见中转染CNTN1 sh RNA质粒的CHMm细胞存在大量绿色荧光,Western blot检测结果显示,转染CNTN1 sh RNA... 

【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

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摘要
英文摘要
1 引言
    1.1 CNTN1基因
        1.1.1 CNTN1基因的结构
        1.1.2 CNTN1基因在非肿瘤疾病中的作用
        1.1.3 CNTN1基因与肿瘤的关系
        1.1.4 CNTN1基因在肿瘤中的作用机制
    1.2 PI3K/Akt信号通路与肿瘤
    1.3 RNAi
        1.3.1 RNAi的发现
        1.3.2 RNAi作用机制
    1.4 本实验研究目的及意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 菌株、质粒和细胞系
        2.1.2 主要仪器设备
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要试剂的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 犬乳腺肿瘤细胞的复苏、传代及冻存
        2.2.2 犬乳腺肿瘤细胞的转染
        2.2.3 sh RNA质粒转化及菌液保种
        2.2.4 sh RNA质粒的提取
        2.2.5 细胞总蛋白提取
        2.2.6 BCA法测定蛋白浓度
        2.2.7 Western blot检测细胞转染前后各蛋白含量的变化
        2.2.8 CCK8法检测细胞增殖能力
        2.2.9 细胞平板克隆形成实验检测单个细胞增殖能力
        2.2.10 细胞划痕实验检测细胞迁移能力
        2.2.11 细胞凋亡实验检测细胞凋亡水平
        2.2.12 实验数据的分析与统计
3 实验结果
    3.1 犬乳腺肿瘤细胞CNTN1基因沉默效果
    3.2 转染的CHMm细胞CNTN1基因的表达
    3.3 CNTN1基因沉默对CHMm细胞增殖的影响
    3.4 CNTN1基因沉默对CHMm细胞凋亡的影响
    3.5 CNTN1沉默对CHMm细胞迁移能力的影响
    3.6 CNTN1基因沉默对CHMm细胞Akt信号通路相关蛋白影响
        3.6.1 CNTN1基因对CHMm细胞中Akt信号通路的影响
        3.6.2 CNTN1基因沉默对CHMm细胞Akt通路凋亡蛋白影响
        3.6.3 CNTN1沉默对CHMm细胞Akt通路周期蛋白表达的影响
        3.6.4 CNTN1基因沉默对CHMm细胞Akt通路转移蛋白表达的影响
4 讨论
    4.1 RNAi技术的优势
    4.2 CNTN1基因作为肿瘤治疗的新靶点
    4.3 CNTN1基因沉默下调AKT信号通路
    4.4 CNTN1基因沉默通过Akt通路调节细胞凋亡
    4.5 CNTN1基因沉默通过Akt通路调节细胞周期
    4.6 CNTN1基因沉默通过Akt通路调节细胞转移
5 结论
致谢
参考文献
附录
攻读硕士学位期间发表的学术论文



本文编号：3002211