黑龙江省犊牛腹泻粪便中大肠杆菌的毒力基因和耐药性调查

发布时间：2021-01-28 22:00

　　犊牛大肠杆菌性腹泻是由产肠毒素性大肠杆菌引起的一种消化道传染病,表现为剧烈腹泻、脱水甚至死亡,给养牛业带来严重的经济损失。临床上抗生素的不规则使用,加剧了细菌的耐药性,耐药菌株不断增多,耐药谱越来越广。目前该病主要采用不同地区大肠杆菌优势毒力因子制成的多价疫苗和敏感药物进行防治。因此,开展犊牛腹泻大肠杆菌的毒力基因和耐药性调查,对防治大肠杆菌性犊牛腹泻具有重要的现实意义。本研究内容包括大肠杆菌肠毒素基因多重PCR方法的建立、毒力基因检测和耐药性调查3个方面。多重PCR检测方法的建立。本研究参照文献合成4对扩增大肠杆菌estA （229bp）、estB （480bp）、elt-Ⅰ（605bp）和elt-Ⅱ（300bp）基因片段的特异性引物,通过对反应条件的优化、敏感性和特异性试验及临床样品检测,建立了检测大肠杆菌肠毒素基因的多重PCR方法。该方法稳定、特异、敏感,最低检出量分别为2.55×101CFU/μL、2×101CFU/μL和2.47×103CFU/μL。毒力基因的检测。从黑龙江省哈尔滨市、阿城、牡丹江、北安、肇东、克东等地区12个奶牛场共采集131份犊牛腹泻粪便样本,共分离到34... 

【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
附件
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 致病性大肠杆菌
        1.1.1 生物学分类地位及结构
        1.1.2 理化特性和血清型
        1.1.3 毒力因子及致病机理
        1.1.4 检测方法
        1.1.5 大肠杆菌耐药性
    1.2 犊牛大肠杆菌病
        1.2.1 病原
        1.2.2 流行病学
        1.2.3 临诊症状及病理变化
        1.2.4 诊断与防治
    1.3 研究的目的与意义
2 材料和方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 菌株、犊牛腹泻粪便样品
        2.1.2 PCR扩增引物
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 大肠杆菌肠毒素基因多重PCR方法的建立
        2.2.2 犊牛腹泻粪便中大肠杆菌的分离鉴定及毒力基因检测
        2.2.3 大肠杆菌分离株的耐药性检测
3 结果与分析
    3.1 大肠杆菌肠毒素基因多重PCR检测方法的建立
        3.1.1 estA、estB、elt-Ⅰ和elt-Ⅱ全长基因克隆
        3.1.2 重组克隆质粒的PCR验证及序列分析
        3.1.3 多重PCR反应条件的优化
        3.1.4 多重PCR特异性
        3.1.5 多重PCR敏感性
        3.1.6 大肠杆菌临床样本的多重PCR检测
        3.1.7 试剂盒的组装
    3.2 犊牛腹泻粪便中大肠杆菌的分离鉴定及毒力基因检测
        3.2.1 大肠杆菌的分离培养
        3.2.2 革兰氏染色镜检
        3.2.3 生化鉴定
        3.2.4 毒力基因检测
    3.3 耐药性检测
        3.3.1 大肠杆菌耐药性分析
        3.3.2 大肠杆菌多重耐药情况
4 讨论
    4.1 多重PCR技术
    4.2 大肠杆菌毒力基因
    4.3 大肠杆菌耐药性
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]锦州地区鸭源致病性大肠杆菌优势血清型间接血凝诊断液的制备[J]. 杨新艳,夏冬华.  黑龙江畜牧兽医. 2013(03)
[2]大肠杆菌F5菌毛胶体金免疫层析检测方法的建立[J]. 杨旭东,刘文鑫,冯瑜菲,胡文霞,师东方.  中国兽医科学. 2010(11)
[3]犊牛大肠杆菌病的诊断及防治措施[J]. 彭志凌.  养殖技术顾问. 2010(09)
[4]仔猪黄白痢大肠杆菌耐药性检测及ERIC图谱分析[J]. 陈俭,姜中其,唐一鸣.  浙江大学学报(农业与生命科学版). 2010(02)
[5]氨基糖苷类药物高水平耐药16S rRNA甲基化酶基因在动物源大肠杆菌中的检测[J]. 李德喜,李新生,杜向党,连明香,张素梅,刘建华.  江西农业学报. 2009(08)
[6]畜牧养殖中细菌耐药性产生机制与对策[J]. 王帅兵,熊良伟,陈晓兰.  动物医学进展. 2009(06)
[7]大肠杆菌K99-ST1双价基因工程菌株的构建及其免疫原性[J]. 李书光,管宇,肖跃强,王金良,沈志强.  中国兽医学报. 2009(05)
[8]犊牛大肠杆菌病的防治[J]. 李志强,胡唐雁.  中国牛业科学. 2009(02)
[9]大肠杆菌O157及其Stx2免疫胶体金层析检测方法的建立[J]. 高成秀,孙建和,严亚贤.  中国兽医科学. 2009(02)
[10]中药消除致病性大肠杆菌耐药性研究进展[J]. 王思芦,杨柳,曾中良,罗音久,文泽强.  中国畜牧兽医. 2008(10)

博士论文
[1]产肠毒素大肠杆菌多价肠毒素疫苗的研究[D]. 尤建嵩.大连理工大学 2011
[2]断奶仔猪源大肠杆菌毒力因子的分子流行病学及F18菌毛部分特性的研究[D]. 成大荣.扬州大学 2005

硕士论文
[1]黑龙江部分奶牛场大肠杆菌耐药性和耐药基因检测分析[D]. 梁宏儒.黑龙江八一农垦大学 2013
[2]大肠杆菌O157的分子流行病学调查和毒力因子研究[D]. 张书萧.吉林农业大学 2012
[3]大肠杆菌不耐热肠毒素突变蛋白的表达及其对粘膜免疫效果的影响[D]. 黄佳佳.扬州大学 2012
[4]德州地区鸡源致病性大肠杆菌流行病学调查与耐药性分析[D]. 蔺慧.山东农业大学 2011
[5]牛源大肠杆菌耐药性及耐药机制研究[D]. 王宏.东北农业大学 2011
[6]犊牛腹泻主要病原菌毒力基因检测及其重组表达[D]. 高立战.中国人民解放军军事医学科学院 2010
[7]陕西省犊牛大肠杆菌性腹泻的流行病学调查及初步免疫试验[D]. 高睿.西北农林科技大学 2008
[8]重庆市及三峡库区大肠杆菌O157的流行病学调查[D]. 丁红雷.西南大学 2006



本文编号：3005767