鸡肉组织中秋水仙碱残留ELISA检测方法的研究
发布时间：2021-01-29 16:30
秋水仙碱是从欧洲百合科植物秋水仙的球茎中分离出的一种卓酚酮类生物碱。因其特殊的结构和强抗癌活性,近几年有关秋水仙碱作用机制的研究异常活跃。临床上常作为痛风性关节炎急性发作和某些癌症治疗的首选药。除此之外,秋水仙碱还广泛应用于抗炎、抗纤维化及免疫调节等方面。因其治疗量和中毒量比较接近,毒副作用较大,所以因误食含秋水仙碱的食物或因治疗剂量与中毒剂量掌握不准、交代不清药物的用法用量等原因导致临床上中毒或致死的现象很多。因此有必要对秋水仙碱药物残留进行检测方法的研究。酶联免疫分析技术（ELISA）具有前处理简单、特异性高、分析成本低等特点,以其固有的优势在药物残留分析中显示出远大的应用前景。因此本研究选择建立秋水仙碱药物的ELISA检测方法,为秋水仙碱药物的残留检测提供了分析方法。本研究采用硫酸水解反应成功地改造了秋水仙碱的分子结构,使其具有活性基团,并采用碳二亚胺（EDC）法和戊二醛（GA）法偶联载体蛋白,成功制备了秋水仙碱的包被原和免疫原。通过对包被原的筛选,选出三甲基-COL-GA-OVA作为包被原以提高检测方法的灵敏度。通过对抗血清的抑制检测筛选,选出三甲基-COL-EDC-BSA作为...
【文章来源】：福建农林大学福建省
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 秋水仙碱文献综述
1 秋水仙碱的概述
2 秋水仙碱临床应用
2.1 治疗痛风性关节炎
2.2 抗肿瘤活性
2.3 治疗病毒性肝炎及肝硬化
2.4 预防心血管疾病
2.5 治疗皮肤病
2.6 抗纤维化及组织增生
2.7 其他临床应用
2.8 不良反应
3 秋水仙碱在农业及中药育种中的应用
4 秋水仙碱检测方法的研究现状
4.1 免疫学分析法
4.2 分光光度法
4.3 电化学方法
4.4 流动注射化学发光法
4.5 流式细胞仪法
4.6 薄层色谱法
4.7 磁共振成像法
4.8 高效液相色谱法（HPLC）
4.9 高效液相色谱-质谱联用及其他检测方法
5 研究目的和意义
6 研究内容
第二章 秋水仙碱多克隆抗体的制备
1 实验材料
1.1 试剂和药品
1.2 仪器与设备
1.3 溶液系统
1.4 实验动物
2 试验方法
2.1 透析袋的预处理
2.2 秋水仙碱人工抗原的合成
2.3 动物免疫
2.4 制备血清
2.5 抗血清的筛选
2.6 抗血清效价的测定
2.7 交叉反应的测定
3 结果与分析
3.1 半抗原高效液相色谱-质谱图分析
3.2 免疫原和包被原的鉴定
3.3 抗血清的筛选
3.4 抗血清效价的测定
3.5 交叉反应的测定
4 讨论
4.1 人工抗原的合成
4.2 抗体的制备和抗血清的筛选
5 小结
第三章 秋水仙碱ELISA检测方法的建立
1 实验材料
1.1 试剂和药品
1.2 仪器与设备
1.3 溶液系统
2 间接竞争ELISA方法条件的优化
2.1 确定最佳包被浓度和多抗的最佳工作浓度
2.2 确定最佳包被液
2.3 确定最佳包被条件
2.4 确定最佳封闭液
2.5 确定最佳封闭时间
2.6 确定竞争反应的最佳反应时间
2.7 确定酶标二抗的最佳反应浓度
2.8 最佳反应缓冲液pH的确定
2.9 最佳反应缓冲液中盐离子浓度的确定
2.10 建立标准曲线
3 鸡肉样品的添加回收试验
3.1 样品前处理
3.2 检测限的确定
3.3 添加回收率的测定
3.4 方法的验证
4 结果与分析
4.1 间接竞争ELISA方法的优化
4.2 鸡肉样品的添加回收试验
5 讨论
6 小结
第四章 总结
1 结论
2 展望
参考文献
缩略词
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]秋水仙碱慢性中毒致肌病1例分析[J]. 吴家顺,周婧. 湖北中医杂志. 2013(12)
[2]加味四妙散联合秋水仙碱治疗急性痛风性关节炎的观察[J]. 黄浔芳,姬森国,张徐明,刘炬,胡玲. 江西医药. 2013(10)
[3]低剂量秋水仙碱联合双氯芬酸钠治疗痛风急性发作疗效观察[J]. 李育红,张清安,万文军. 药物流行病学杂志. 2013(09)
[4]秋水仙碱联合消炎痛栓治疗痛风性关节炎的效果研究[J]. 邓日远. 中国医学创新. 2013(17)
[5]秋水仙碱离体诱导半枝莲多倍体的研究[J]. 赵晓潘,瞿大枞,陈崇顺. 江苏农业科学. 2013(03)
[6]秋水仙碱致横纹肌溶解综合征合并急性肾衰竭1例[J]. 梁莹,王妍春. 实用医学杂志. 2013(06)
[7]服用秋水仙碱导致脊髓亚联合变性1例报告[J]. 胡昊,周鸿飞. 吉林医学. 2013(08)
[8]秋水仙碱诱导亚麻四倍体的技术研究[J]. 郭永霞,王丽艳,孙强,潘翠翠,殷奎德. 激光生物学报. 2013(01)
[9]纯天然食物与人类健康安全[J]. 楼秀余. 科技传播. 2013(01)
[10]秋水仙碱体外抗乙型肝炎病毒的作用[J]. 孔维涵,方步武,朱争艳,高英堂,丁贤,杜智. 中国医院药学杂志. 2012(24)
博士论文
[1]六味痛风饮防治痛风性关节炎作用机理的实验研究[D]. 赵恒立.山东中医药大学 2009
[2]秋水仙碱口服缓控释剂型研究[D]. 王文苹.成都中医药大学 2008
硕士论文
[1]痛风宁颗粒对鸡痛风模型血清黄嘌呤氧化酶活性和肾功能的影响[D]. 赖震.福建中医学院 2005
本文编号：3007202
【文章来源】：福建农林大学福建省
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 秋水仙碱文献综述
1 秋水仙碱的概述
2 秋水仙碱临床应用
2.1 治疗痛风性关节炎
2.2 抗肿瘤活性
2.3 治疗病毒性肝炎及肝硬化
2.4 预防心血管疾病
2.5 治疗皮肤病
2.6 抗纤维化及组织增生
2.7 其他临床应用
2.8 不良反应
3 秋水仙碱在农业及中药育种中的应用
4 秋水仙碱检测方法的研究现状
4.1 免疫学分析法
4.2 分光光度法
4.3 电化学方法
4.4 流动注射化学发光法
4.5 流式细胞仪法
4.6 薄层色谱法
4.7 磁共振成像法
4.8 高效液相色谱法（HPLC）
4.9 高效液相色谱-质谱联用及其他检测方法
5 研究目的和意义
6 研究内容
第二章 秋水仙碱多克隆抗体的制备
1 实验材料
1.1 试剂和药品
1.2 仪器与设备
1.3 溶液系统
1.4 实验动物
2 试验方法
2.1 透析袋的预处理
2.2 秋水仙碱人工抗原的合成
2.3 动物免疫
2.4 制备血清
2.5 抗血清的筛选
2.6 抗血清效价的测定
2.7 交叉反应的测定
3 结果与分析
3.1 半抗原高效液相色谱-质谱图分析
3.2 免疫原和包被原的鉴定
3.3 抗血清的筛选
3.4 抗血清效价的测定
3.5 交叉反应的测定
4 讨论
4.1 人工抗原的合成
4.2 抗体的制备和抗血清的筛选
5 小结
第三章 秋水仙碱ELISA检测方法的建立
1 实验材料
1.1 试剂和药品
1.2 仪器与设备
1.3 溶液系统
2 间接竞争ELISA方法条件的优化
2.1 确定最佳包被浓度和多抗的最佳工作浓度
2.2 确定最佳包被液
2.3 确定最佳包被条件
2.4 确定最佳封闭液
2.5 确定最佳封闭时间
2.6 确定竞争反应的最佳反应时间
2.7 确定酶标二抗的最佳反应浓度
2.8 最佳反应缓冲液pH的确定
2.9 最佳反应缓冲液中盐离子浓度的确定
2.10 建立标准曲线
3 鸡肉样品的添加回收试验
3.1 样品前处理
3.2 检测限的确定
3.3 添加回收率的测定
3.4 方法的验证
4 结果与分析
4.1 间接竞争ELISA方法的优化
4.2 鸡肉样品的添加回收试验
5 讨论
6 小结
第四章 总结
1 结论
2 展望
参考文献
缩略词
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]秋水仙碱慢性中毒致肌病1例分析[J]. 吴家顺,周婧. 湖北中医杂志. 2013(12)
[2]加味四妙散联合秋水仙碱治疗急性痛风性关节炎的观察[J]. 黄浔芳,姬森国,张徐明,刘炬,胡玲. 江西医药. 2013(10)
[3]低剂量秋水仙碱联合双氯芬酸钠治疗痛风急性发作疗效观察[J]. 李育红,张清安,万文军. 药物流行病学杂志. 2013(09)
[4]秋水仙碱联合消炎痛栓治疗痛风性关节炎的效果研究[J]. 邓日远. 中国医学创新. 2013(17)
[5]秋水仙碱离体诱导半枝莲多倍体的研究[J]. 赵晓潘,瞿大枞,陈崇顺. 江苏农业科学. 2013(03)
[6]秋水仙碱致横纹肌溶解综合征合并急性肾衰竭1例[J]. 梁莹,王妍春. 实用医学杂志. 2013(06)
[7]服用秋水仙碱导致脊髓亚联合变性1例报告[J]. 胡昊,周鸿飞. 吉林医学. 2013(08)
[8]秋水仙碱诱导亚麻四倍体的技术研究[J]. 郭永霞,王丽艳,孙强,潘翠翠,殷奎德. 激光生物学报. 2013(01)
[9]纯天然食物与人类健康安全[J]. 楼秀余. 科技传播. 2013(01)
[10]秋水仙碱体外抗乙型肝炎病毒的作用[J]. 孔维涵,方步武,朱争艳,高英堂,丁贤,杜智. 中国医院药学杂志. 2012(24)
博士论文
[1]六味痛风饮防治痛风性关节炎作用机理的实验研究[D]. 赵恒立.山东中医药大学 2009
[2]秋水仙碱口服缓控释剂型研究[D]. 王文苹.成都中医药大学 2008
硕士论文
[1]痛风宁颗粒对鸡痛风模型血清黄嘌呤氧化酶活性和肾功能的影响[D]. 赖震.福建中医学院 2005
本文编号：3007202
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