新疆伊犁地区马疱疹病毒1型的分离鉴定及其gB和gD基因的序列分析

发布时间：2017-04-12 05:14

  本文关键词：新疆伊犁地区马疱疹病毒1型的分离鉴定及其gB和gD基因的序列分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：马疱疹病毒1型(Equine herpesvirses 1,EHV-1)属于α疱疹病毒亚科的成员。马属动物感染本病毒后其临床表现以流产、急性呼吸道疾病、共济失调和病毒血症等典型特征。马鼻肺炎(Equine rhinopneumonitis,ER)在我国广泛存在且严重威胁着马匹健康发展,造成较大的经济损失。本研究旨在从新疆伊犁地区疑似马鼻肺炎病例中分离和鉴定EHV-1流行株,为新疆马鼻肺炎的流行病学调查和疫苗研制奠定基础。本研究从新疆伊犁地区疑似马鼻肺炎孕马的流产胎儿中采集肺组织,将肺组织匀浆液分别接种BHK-21和MDBK细胞,同时分别采用病原学、血清学和分子生物方法对分离的病毒进行鉴定。结果显示,匀浆液接种细胞48 h后,细胞出现典型的圆缩、融合、脱落和聚堆成葡萄串状等致细胞病变效应(cytopathic effect,CPE);聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增一条622 bp的特异性条带;PCR扩增产物核酸序列与GenBank中EHV-1(GenBank登录号:KF644579.1)gB基因的同源性为100%;病毒滴度TCID50为105.8/0.1 mL;经理化特性测定该病毒不耐酸,不耐热,对紫外、氯仿和乙醚处理敏感;经透射电镜观察该病毒颗粒为圆形,有囊膜,直径约为130 nm;中和试验显示,EHV-1标准阳性血清能够中和分离毒株,能抑制病毒引起的CPE,EHV-1阳性血清的中和效价为l:24;间接免疫荧光试验显示,接毒细胞出现特异性的绿色荧光。因此,本研究成功分离得到马疱疹病毒1型病毒株,并将其命名为EHV-1-XJ2015株。为进一步研究该分离毒株的部分基因组成及生物学功能等信息,本研究利用特异性引物分别扩增分离毒株的gB、gD基因,将其克隆至pMD19-T载体中,筛选阳性克隆,进行核酸序列测定;同时,采用生物信息学软件分别对gB与gD基因的核酸同源性和遗传性进行分析,并预测其编码蛋白的二级结构和三级结构。结果显示,EHV-1-XJ2015分离株属于EHV-1;gB和gD核酸的保守性较好,各分离株之间变异较小。通过对该毒株gB和gD基因的序列分析,为常规疫苗和基因工程疫苗候选株的筛选提供技术支撑。
【关键词】：马疱疹病毒1型 分离鉴定 gB基因 gD基因 序列分析
【学位授予单位】：新疆农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.65
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 英文缩略表7-8
• 第1章 绪论8-18
• 1.1 生物学特性8-11
• 1.2 病毒的流行病学11-12
• 1.3 病毒的致病机理12
• 1.4 病毒的分离鉴定12-15
• 1.5 疫苗的研究及现状15-16
• 1.6 研究目的和意义16-18
• 第2章 新疆伊犁马疱疹病毒1型的分离与鉴定18-35
• 2.1 材料18-19
• 2.2 方法19-25
• 2.3 结果25-33
• 2.4 讨论33-35
• 第3章 马疱疹病毒1型gB和gD基因的克隆测序及其序列分析35-53
• 3.1 材料35-36
• 3.2 方法36-42
• 3.3 结果42-51
• 3.4 讨论51-53
• 全文结论53-54
• 附录54-57
• 参考文献57-63
• 致谢63-64
• 作者简介64

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本文编号：300789