山羊αs1-酪蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
发布时间：2021-01-30 14:04
无论是对于哺乳羔羊,还是以羊奶粉为营养的人类而言,山羊酪蛋白都是最关键的营养成分。另外,羊乳酪蛋白合成和分泌的水平,也是反映山羊乳腺上皮细胞生理功能状态的重要指标之一。因而,测定山羊酪蛋白,不仅对于准确评估山羊乳汁干物质含量、确定羊奶加工产品质量,而且对评估山羊乳腺生理状态、乳腺上皮细胞的鉴定和功能鉴定等都具有极其重要的理论和应用价值。以单克隆抗体为工具建立的蛋白质定性和定量测定技术是蛋白质测定中最常用、最普遍、最科学的技术,但这一技术的前提条件是必须研制出检测靶蛋白的单克隆抗体。本研究以山羊乳为材料,采用蛋白质分离技术对羊乳酪蛋白进行了分离,以纯化的酪蛋白为抗原,免疫6周龄BALB/c小鼠,建立酪蛋白抗体的ELISA测定技术,测定免疫小鼠的酪蛋白抗体效价,采用常规的单克隆抗体制备技术,用免疫小鼠脾细胞和SP2/0细胞制备筛选出分泌抗酪蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞,并对单克隆抗体按照常规要求指标进行鉴定,最后初步探讨研制的αs1酪蛋白单克隆抗体在一些检测技术中应用的可行性。研究获得如下结果:1.获得了纯化的山羊酪蛋白和相应的免疫血清。2.山羊酪蛋白优化包被浓度为10μg/mL,包被时...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：47 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
山羊酪蛋白的SDS-PAGE分析
图 3-1 杂交瘤 5B 单克隆化后分裂增殖结果(40×)Figure 3-1 The proliferation of hybrodoma 5B (40×)抗体效价测定结果测定 5B 细胞株上清、未纯化腹水的效价，OD450值如表 3为 1:28，未纯化腹水效价为 1:105。胞株连续传代并冻存复苏 4 次，ELISA 方法测定上清抗体代数 OD450值均在 1.5 左右， 冻存复苏后 OD450值均在 1表 3-2 5B 细胞培养上清和腹水效价检测结果Table 3-2 Testing results of 5B culture supernatant and ascites titers胞株ll strain上清和腹水效价Titers of supernatant and ascites细胞培养上清Culture supernatant未纯化Un-pur5B 1:281表 3-3 细胞连续传代的培养上清 OD450值
表 3-4 杂交瘤细胞反复冻存复苏培养上清 OD450 值 3-4 OD450values of hybridoma culture supernatant after freez冻存复苏次数The times of freeze-thaw1 2 3 1.521±0.012 1.482±0.025 1.503±0.009 胞染色体组型分析结果细胞核内的全部染色体的形态特征分析，利用染色常遗传(邓传良 et al. 2012)。BALB/c 鼠脾细胞染数目是 62-68 条，杂交瘤染色体数目接近母本细如图 3-2，新形成的细胞株 5B 染色体数量是 98 条
【参考文献】：
期刊论文
[1]羊乳制品中牛乳源成分的鉴别检测技术[J]. 宋蓓,宋桂雪,宋薇. 食品科学技术学报. 2016(06)
[2]一种从羊奶中检测牛奶和大豆成分多重实时荧光定量PCR方法的建立[J]. 范阳阳,张荦嘉,刘艳艳,卞如如,霍胜楠,张卉,张全芳,步迅. 山东农业科学. 2016(06)
[3]采用电子鼻检测羊奶中的牛奶掺入[J]. 金嫘,白丽娟,彭小雨,于情情. 食品与发酵工业. 2015(04)
[4]羊乳中牛乳成分快速检测方法的建立[J]. 赵芳,张欢. 安徽农业科学. 2014(32)
[5]电子鼻对羊奶中三种抗生素残留的快速检测[J]. 王妍稳,张瑶,丁武. 食品安全质量检测学报. 2013(04)
[6]不同哺乳动物乳中主要营养成分比较的研究进展[J]. 李龙柱,张富新,贾润芳,晏慧莉,陈雪. 食品工业科技. 2012(19)
[7]基于fisher线性判别和BP神经网络的电子鼻羊奶贮藏时间预测[J]. 张虹艳,丁武. 中国食品学报. 2012(06)
[8]利用电子鼻区分羊奶中不同浓度抗生素[J]. 张瑶,丁武. 食品与机械. 2011(06)
[9]以羊奶和牛奶为原料的新鲜干酪风味的对比研究[J]. 甄贞,许晓曦,滕国新,邓群,骆承庠. 东北农业大学学报. 2009(06)
[10]山羊奶营养及加工工艺特性[J]. 陈建明,冯建忠,张居农. 中国奶牛. 2009(04)
硕士论文
[1]羊乳中牛乳掺假的胶体金免疫层析试纸条检测研究[D]. 王帅星.西北农林科技大学 2016
[2]电子鼻对羊奶及羊奶粉掺假的快速检测研究[D]. 马利杰.西北农林科技大学 2015
[3]电子鼻对羊奶中三种抗生素快速检测的研究[D]. 张瑶.西北农林科技大学 2013
本文编号：3009030
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：47 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
山羊酪蛋白的SDS-PAGE分析
图 3-1 杂交瘤 5B 单克隆化后分裂增殖结果(40×)Figure 3-1 The proliferation of hybrodoma 5B (40×)抗体效价测定结果测定 5B 细胞株上清、未纯化腹水的效价，OD450值如表 3为 1:28，未纯化腹水效价为 1:105。胞株连续传代并冻存复苏 4 次，ELISA 方法测定上清抗体代数 OD450值均在 1.5 左右， 冻存复苏后 OD450值均在 1表 3-2 5B 细胞培养上清和腹水效价检测结果Table 3-2 Testing results of 5B culture supernatant and ascites titers胞株ll strain上清和腹水效价Titers of supernatant and ascites细胞培养上清Culture supernatant未纯化Un-pur5B 1:281表 3-3 细胞连续传代的培养上清 OD450值
表 3-4 杂交瘤细胞反复冻存复苏培养上清 OD450 值 3-4 OD450values of hybridoma culture supernatant after freez冻存复苏次数The times of freeze-thaw1 2 3 1.521±0.012 1.482±0.025 1.503±0.009 胞染色体组型分析结果细胞核内的全部染色体的形态特征分析，利用染色常遗传(邓传良 et al. 2012)。BALB/c 鼠脾细胞染数目是 62-68 条，杂交瘤染色体数目接近母本细如图 3-2，新形成的细胞株 5B 染色体数量是 98 条
【参考文献】：
期刊论文
[1]羊乳制品中牛乳源成分的鉴别检测技术[J]. 宋蓓,宋桂雪,宋薇. 食品科学技术学报. 2016(06)
[2]一种从羊奶中检测牛奶和大豆成分多重实时荧光定量PCR方法的建立[J]. 范阳阳,张荦嘉,刘艳艳,卞如如,霍胜楠,张卉,张全芳,步迅. 山东农业科学. 2016(06)
[3]采用电子鼻检测羊奶中的牛奶掺入[J]. 金嫘,白丽娟,彭小雨,于情情. 食品与发酵工业. 2015(04)
[4]羊乳中牛乳成分快速检测方法的建立[J]. 赵芳,张欢. 安徽农业科学. 2014(32)
[5]电子鼻对羊奶中三种抗生素残留的快速检测[J]. 王妍稳,张瑶,丁武. 食品安全质量检测学报. 2013(04)
[6]不同哺乳动物乳中主要营养成分比较的研究进展[J]. 李龙柱,张富新,贾润芳,晏慧莉,陈雪. 食品工业科技. 2012(19)
[7]基于fisher线性判别和BP神经网络的电子鼻羊奶贮藏时间预测[J]. 张虹艳,丁武. 中国食品学报. 2012(06)
[8]利用电子鼻区分羊奶中不同浓度抗生素[J]. 张瑶,丁武. 食品与机械. 2011(06)
[9]以羊奶和牛奶为原料的新鲜干酪风味的对比研究[J]. 甄贞,许晓曦,滕国新,邓群,骆承庠. 东北农业大学学报. 2009(06)
[10]山羊奶营养及加工工艺特性[J]. 陈建明,冯建忠,张居农. 中国奶牛. 2009(04)
硕士论文
[1]羊乳中牛乳掺假的胶体金免疫层析试纸条检测研究[D]. 王帅星.西北农林科技大学 2016
[2]电子鼻对羊奶及羊奶粉掺假的快速检测研究[D]. 马利杰.西北农林科技大学 2015
[3]电子鼻对羊奶中三种抗生素快速检测的研究[D]. 张瑶.西北农林科技大学 2013
本文编号：3009030
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