鹅细小病毒VP3基因重组腺病毒的构建及其免疫原性
发布时间：2021-02-01 08:07
小鹅瘟是由鹅细小病毒（GPV）引起的一种急性或亚急性传染病,12周龄雏鹅死亡率高达90100%,严重危害养鹅业的健康发展。GPV是细小病毒科的重要成员,VP3蛋白是构成病毒衣壳的主要结构蛋白,能诱导机体产生中和抗体。因此,VP3蛋白成为小鹅瘟基因工程疫苗研制的首选靶蛋白。本研究通过PCR方法扩增GPV的VP3基因,将其重组至腺病毒载体,在体外包装成能够高效表达VP3蛋白的重组腺病毒,并观察其免疫原性,旨在为研究GPV重组活载体疫苗奠定基础。（1）VP3基因的重组穿梭质粒的构建:以p DC-VP3重组质粒为模板,采用PCR方法扩增获得长度为1605 bp的VP3基因,并将其克隆至穿梭质粒pac Ad5 CMV K-Np A,获得重组穿梭质粒pac Ad-VP3。（2）VP3重组腺病毒的构建:经Pac I线性化的pac Ad-VP3及骨架质粒pac Ad59.2-100在脂质体介导下共转染HEK293AD细胞,获得重组腺病毒rAd-VP3。rAd-VP3连续传代至F6代,病毒效价可达10-8.23/0.1 m L TCID50。（3）rAd-VP...
【文章来源】：广东海洋大学广东省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
GPV基因结构示意图
图 1-2 腺病毒结构示意图[90]Fig.1-2 Diagram structure of adenovirus.7.2 腺病毒在动物疫苗研制中的应用腺病毒载体已在猪圆环病毒[91,92]、猪繁殖与呼吸综合征病毒[93]、狂犬病毒[94]瘟病毒[95]和流感病毒[96]等的疫苗构建上得到广泛应用，并取得了较为理想的免果。腺病毒载体用于构建鹅细小病毒疫苗刚刚起步，刘红玉[97]将 GPV 与 MDPV P3 基因分别克隆到 pShuttle-CMV 载体，经 PmeI 线性化后电转至 BJ5183 感受态菌 pAdEasy-1 腺病毒骨架质粒进行菌内的同源重组，再转染到 HEK293 细胞，PC间接免疫荧光试验表明构建的重组腺病毒能在真核细胞中有效表达水禽VP3蛋白研究新型的水禽细小病毒疫苗提供了一个新思路。孟繁宇[98]以同样的方法构建PV VP3 腺病毒载体疫苗，PCR 与 Western-blot 鉴定了 VP3 蛋白在 HEK293 细胞到成功表达，并在此基础上进行了小鼠免疫试验，结果表明该重组腺病毒诱导小生了较好的免疫反应。可见腺病毒用于开发小鹅瘟新型基因疫苗具有较大的潜力望在实际生产中推广应用。本研究在前人的研究基础上，选用 Cell Biolabs 公司的新型腺病毒包装系统，节省了包装出毒的时间，另外，弥补了前人未在本体动
GPVVP3重组腺病毒的构建Fig.2-1ConstructionofGPVVP3recombinantadenoviruses
【参考文献】：
期刊论文
[1]番鸭细小病毒和鹅细小病毒的抗原相关性研究[J]. 程晓霞,陈仕龙,陈少莺,林锋强,王劭,朱小丽. 福建农业学报. 2013(09)
[2]鹅细小病毒VP3亚单位疫苗的制备及其免疫效果[J]. 杨焕章,王凯,陈绍红,刘艳芬,刘铀. 动物医学进展. 2013(10)
[3]共表达鹅细小病毒VP3-gIL2重组乳酸杆菌的构建及其口服免疫评价[J]. 丁轲,余祖华,李旺,闫文朝,王臣,赵战勤,程相朝,张春杰,王天奇,程安春,汪铭书. 畜牧兽医学报. 2013(02)
[4]狂犬病病毒SRV9株糖蛋白333位氨基酸变异对其免疫原性的影响[J]. 孙程龙,杨洋,王颖,宫婷,刘祥义,陈奇,王景龙,刘晔,张守峰,扈荣良. 中国生物制品学杂志. 2012(05)
[5]小鹅瘟病毒VP3基因的原核表达[J]. 赵文婧,鲁承,黄京爱,王暖成,朴相哲. 中国兽医杂志. 2012(03)
[6]鹅细小病毒vp2基因工程亚单位疫苗的免疫试验[J]. 高旭,张颖,鲁承,修占伍. 吉林农业. 2012(01)
[7]小鹅瘟病毒VP3真核表达质粒与弱毒疫苗诱导鹅体免疫应答的比较[J]. 朱德康,黎敏,车茜,程安春,汪铭书,陈孝跃. 中国农业科学. 2011(03)
[8]鹅细小病毒NS2蛋白间接ELISA方法的建立[J]. 尚绪增,张雅为,王兆鹏,鞠环宇,马波,王君伟. 中国预防兽医学报. 2010(08)
[9]共表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因和猪瘟病毒E2基因的重组腺病毒的构建及其在小鼠模型上的免疫原性分析[J]. 李宏宇,孙元,常天明,贺番,黄俊华,仇华吉. 中国预防兽医学报. 2010(03)
[10]抗鹅细小病毒VP3蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 郭鹭,荆志强,李俚,鞠环宇,马波,王君伟. 中国兽医科学. 2010(02)
硕士论文
[1]小鹅瘟肠道损伤机制的研究与VP3基因重组腺病毒的构建[D]. 孟繁宇.东北农业大学 2013
[2]表达H5N1禽流感病毒HA基因重组腺病毒的构建及免疫保护性研究[D]. 王伟.东北农业大学 2013
[3]水禽细小病毒VP3蛋白表位鉴定及重组腺病毒载体构建[D]. 刘红玉.东北农业大学 2013
[4]猪圆环病毒2型Cap蛋白基因重组腺病毒的构建及实验免疫研究[D]. 宫婷.吉林农业大学 2013
[5]小鹅瘟病毒VP3基因的克隆表达及抗小鹅瘟病毒单克隆抗体的研制[D]. 鹿钟文.扬州大学 2012
[6]鹅细小病毒98E鸭胚致弱株的培育及生物学特性研究[D]. 王春媛.东北农业大学 2012
[7]小鹅瘟细胞适应毒的培育及其特性的研究[D]. 刘兵.扬州大学 2012
[8]鹅细小病毒VP3基因的原核表达及其单克隆抗体的研制[D]. 王娟.扬州大学 2012
[9]抗小鹅瘟病毒单克隆抗体的制备及胶体金免疫层析试纸条的研制[D]. 刘飞.南京农业大学 2011
[10]流感病毒H5/H3亚型重组腺病毒疫苗构建及实验免疫研究[D]. 张丹.吉林大学 2011
本文编号：3012467
【文章来源】：广东海洋大学广东省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
GPV基因结构示意图
图 1-2 腺病毒结构示意图[90]Fig.1-2 Diagram structure of adenovirus.7.2 腺病毒在动物疫苗研制中的应用腺病毒载体已在猪圆环病毒[91,92]、猪繁殖与呼吸综合征病毒[93]、狂犬病毒[94]瘟病毒[95]和流感病毒[96]等的疫苗构建上得到广泛应用，并取得了较为理想的免果。腺病毒载体用于构建鹅细小病毒疫苗刚刚起步，刘红玉[97]将 GPV 与 MDPV P3 基因分别克隆到 pShuttle-CMV 载体，经 PmeI 线性化后电转至 BJ5183 感受态菌 pAdEasy-1 腺病毒骨架质粒进行菌内的同源重组，再转染到 HEK293 细胞，PC间接免疫荧光试验表明构建的重组腺病毒能在真核细胞中有效表达水禽VP3蛋白研究新型的水禽细小病毒疫苗提供了一个新思路。孟繁宇[98]以同样的方法构建PV VP3 腺病毒载体疫苗，PCR 与 Western-blot 鉴定了 VP3 蛋白在 HEK293 细胞到成功表达，并在此基础上进行了小鼠免疫试验，结果表明该重组腺病毒诱导小生了较好的免疫反应。可见腺病毒用于开发小鹅瘟新型基因疫苗具有较大的潜力望在实际生产中推广应用。本研究在前人的研究基础上，选用 Cell Biolabs 公司的新型腺病毒包装系统，节省了包装出毒的时间，另外，弥补了前人未在本体动
GPVVP3重组腺病毒的构建Fig.2-1ConstructionofGPVVP3recombinantadenoviruses
【参考文献】：
期刊论文
[1]番鸭细小病毒和鹅细小病毒的抗原相关性研究[J]. 程晓霞,陈仕龙,陈少莺,林锋强,王劭,朱小丽. 福建农业学报. 2013(09)
[2]鹅细小病毒VP3亚单位疫苗的制备及其免疫效果[J]. 杨焕章,王凯,陈绍红,刘艳芬,刘铀. 动物医学进展. 2013(10)
[3]共表达鹅细小病毒VP3-gIL2重组乳酸杆菌的构建及其口服免疫评价[J]. 丁轲,余祖华,李旺,闫文朝,王臣,赵战勤,程相朝,张春杰,王天奇,程安春,汪铭书. 畜牧兽医学报. 2013(02)
[4]狂犬病病毒SRV9株糖蛋白333位氨基酸变异对其免疫原性的影响[J]. 孙程龙,杨洋,王颖,宫婷,刘祥义,陈奇,王景龙,刘晔,张守峰,扈荣良. 中国生物制品学杂志. 2012(05)
[5]小鹅瘟病毒VP3基因的原核表达[J]. 赵文婧,鲁承,黄京爱,王暖成,朴相哲. 中国兽医杂志. 2012(03)
[6]鹅细小病毒vp2基因工程亚单位疫苗的免疫试验[J]. 高旭,张颖,鲁承,修占伍. 吉林农业. 2012(01)
[7]小鹅瘟病毒VP3真核表达质粒与弱毒疫苗诱导鹅体免疫应答的比较[J]. 朱德康,黎敏,车茜,程安春,汪铭书,陈孝跃. 中国农业科学. 2011(03)
[8]鹅细小病毒NS2蛋白间接ELISA方法的建立[J]. 尚绪增,张雅为,王兆鹏,鞠环宇,马波,王君伟. 中国预防兽医学报. 2010(08)
[9]共表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因和猪瘟病毒E2基因的重组腺病毒的构建及其在小鼠模型上的免疫原性分析[J]. 李宏宇,孙元,常天明,贺番,黄俊华,仇华吉. 中国预防兽医学报. 2010(03)
[10]抗鹅细小病毒VP3蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 郭鹭,荆志强,李俚,鞠环宇,马波,王君伟. 中国兽医科学. 2010(02)
硕士论文
[1]小鹅瘟肠道损伤机制的研究与VP3基因重组腺病毒的构建[D]. 孟繁宇.东北农业大学 2013
[2]表达H5N1禽流感病毒HA基因重组腺病毒的构建及免疫保护性研究[D]. 王伟.东北农业大学 2013
[3]水禽细小病毒VP3蛋白表位鉴定及重组腺病毒载体构建[D]. 刘红玉.东北农业大学 2013
[4]猪圆环病毒2型Cap蛋白基因重组腺病毒的构建及实验免疫研究[D]. 宫婷.吉林农业大学 2013
[5]小鹅瘟病毒VP3基因的克隆表达及抗小鹅瘟病毒单克隆抗体的研制[D]. 鹿钟文.扬州大学 2012
[6]鹅细小病毒98E鸭胚致弱株的培育及生物学特性研究[D]. 王春媛.东北农业大学 2012
[7]小鹅瘟细胞适应毒的培育及其特性的研究[D]. 刘兵.扬州大学 2012
[8]鹅细小病毒VP3基因的原核表达及其单克隆抗体的研制[D]. 王娟.扬州大学 2012
[9]抗小鹅瘟病毒单克隆抗体的制备及胶体金免疫层析试纸条的研制[D]. 刘飞.南京农业大学 2011
[10]流感病毒H5/H3亚型重组腺病毒疫苗构建及实验免疫研究[D]. 张丹.吉林大学 2011
本文编号：3012467
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