三种犬呼吸道常见病毒多重PCR检测方法建立

发布时间：2021-02-02 10:58

　　为建立犬呼吸道冠状病毒（Canine respiratory coronavirus,CRCoV）、犬细小病毒（Canine parvovirus,CPV）、犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）3种病毒的多重PCR方法,根据GenBank中CRCoV、CPV和CDV的基因序列,进行BLAST同源性分析,找出保守序列,并根据保守序列对每个病毒设计引物,建立扩增3种病毒的多重PCR方法,并通过已建立的方法对收集的呼吸道病犬病料进行检测。结果表明,所建立的三重PCR体系组成为2×Taq Mix 12.5μL,3对上、下游引物各0.6μL,混合模板1μL,ddH₂O 7.9μL;扩增程序为94℃5 min;94℃30 s,54℃1 min,72℃24 s,共35个循环;72℃8 min。该方法具有较高的灵敏性和特异性。临床验证实验表明,本实验所建立的多重PCR方法可用于临床诊断。 

【文章来源】：上海畜牧兽医通讯. 2020,(06)

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

三重PCR的检测结果

单个病毒的PCR检测结果显示:CPV的PCR检测(图1),46～54 ℃均能获得清晰的条带;CDV的PCR检测(图2),52、54 ℃能获得清晰的条带;CRCoV的PCR检测(图3),54 ℃能显示出清晰的条带。综合3个单病毒扩增检测结果,选择54 ℃为多重PCR退火温度。图2 不同退火温度的CDV PCR检测结果

不同退火温度的CDV PCR检测结果

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3014582