Musclin基因对成肌细胞增殖、葡萄糖摄取和氨基酸分解的影响及其分子机制

发布时间：2021-02-02 20:58

　　Musclin是由骨骼肌特异性分泌的一种蛋白,有报道显示它的表达受到多种因素的影响,其生理作用与糖代谢、脂肪代谢有关。目前有关musclin基因的研究报道较少,有关musclin对未分化成肌细胞增殖、葡萄糖摄取和氨基酸分解代谢的作用及其机制尚未见有研究报道。因此,本试验旨在利用过表达和RNA干扰技术来阐明以上问题,以为最终阐明musclin在成肌和肌肉发育过程中的作用及机制奠定基础,也为畜禽和人类的健康提供依据。试验一：本试验共分为七组：Untreated control、pcDNA vector、pcDNA-musclin、 Control siRNA、Musclin siRNA、pcDNA vector+Control siRNA、pcDNA-musclin+Musclin siRNA。分别进行细胞瞬时转染,转染后收集培养液和细胞,进行了相关检测。结果表明：（1） musclin荧光定量PCR结果显示：与未转染的正常组相比,转染pcDNA3.1（+）的过表达对照组、转染Control siRNA的干扰对照组、转染pcDNA3.1（+）和Control siRNA的过表达对照+干扰对... 

【文章来源】：山西农业大学山西省

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
前言
文献综述
    1 骨骼肌与糖代谢
        1.1 PI3K-AKT通路
        1.2 GLUT4
        1.3 PPARγ-LXRα通路
    2 Musclin基因的研究进展
        2.1 Musclin基因的发现和结构
        2.2 Musclin基因的生物学功能
    3 肌卫星细胞研究进展
本研究的立项依据和研究意义
试验一 Musclin基因过表达和沉默成肌细胞增殖、葡萄糖摄取、氨基酸分解及其相关基因表达的影响及其作用机制
    1 试验材料
        1.1 细胞
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器
        1.4 常用试剂配制
    2 试验方法
        2.1 小鼠C2C12细胞的传代培养
        2.2 pcDNA3.1（+）-musclin真核表达载体和pcDNA3.1（+）的无内毒素质粒DNA提取
        2.3 小鼠C2C12细胞的转染
        2.4 细胞RNA提取
        2.5 RNA电泳
        2.6 反转录
        2.7 荧光定量PCR
            2.7.1 荧光定量PCR的引物
            2.7.2 RT-PCR反应用量及反应条件
        2.8 营养指标测定
            2.8.1 培养液中葡萄糖浓度的测定
            2.8.2 培养液中尿素氮浓度测定
    3 结果与分析
        3.1 小鼠成肌细胞C2C12瞬时转染试验的效率结果
        3.2 不同转染组小鼠成肌细胞RNA提取结果
        3.3 不同处理组中musclin mRNA表达差异
        3.4 Musclin基因表达差异对小鼠成肌细胞增殖的影响
        3.5 Musclin基因表达差异对营养指标的影响
            3.5.1 Musclin基因过表达和沉默对培养液中葡萄糖含量的影响
            3.5.2 Musclin基因过表达和沉默对培养液中尿素氮含量的影响
        3.6 Musclin基因过表达和沉默对各相关基因表达的影响
            3.6.1 不同转染组AKT1 mRNA表达的差异
            3.6.2 不同转染组AKT2 mRNA表达的差异
            3.6.3 不同转染组PI3K p110 mRNA表达的差异
            3.6.4 不同转染组PPARγ mRNA表达的差异
            3.6.5 不同转染组LXRα mRNA表达的差异
            3.6.6 不同转染组GLUT4 mRNA表达的差异
    4 讨论
        4.1 关于实时荧光定量PCR
        4.2 Musclin基因的过表达和沉默效果
        4.3 Musclin基因过表达和沉默对细胞增殖的作用
        4.4 Musclin基因过表达和沉默对葡萄糖和尿素氮的影响
        4.5 Musclin基因过表达和沉默对相关基因表达的影响
试验二 绵羊骨骼肌肌卫星细胞的分离与鉴定
    1 试验材料
        1.1 动物组织
        1.2 细胞试验相关试剂和分子生化试剂
        1.3 试验仪器
        1.4 常用试剂的配制与缓冲液
    2 试验方法
        2.1 绵羊骨骼肌肌卫星细胞的原代培养与纯化
        2.2 绵羊骨骼肌肌卫星细胞的传代培养
        2.3 绵羊肌卫星细胞的冻存和复苏
        2.4 绵羊肌卫星细胞的鉴定
            2.4.1 Myostatin基因的扩增
                2.4.1.1 细胞RNA的提取
                2.4.1.2 RNA电泳
                2.4.1.3 反转录
                2.4.1.4 RT-PCR扩增绵羊Myostatin基因
            2.4.2 Desmin细胞免疫化学
            2.4.3 绵羊肌卫星细胞的分化
    3 结果与分析
        3.1 RNA提取结果
        3.2 绵羊Myostatin基因PCR扩增
        3.3 Desmin细胞免疫化学
        3.4 绵羊肌卫星细胞细胞分化结果
    4 讨论
        4.1 绵羊肌卫星细胞内Myostatin基因的PCR扩增
        4.2 关于免疫细胞化学
        4.3 有关细胞分化
全文结论
参考文献
Abstract
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]肌卫星细胞增殖及分化影响因素研究进展[J]. 张蔚菁,贾懿劼,田京.  国际骨科学杂志. 2013(02)
[2]乌珠穆沁羊成肌细胞的诱导分化及相关基因表达[J]. 魏彩虹,王皓,杜立新,李发弟.  农业生物技术学报. 2012(03)
[3]有氧运动对2型糖尿病大鼠血清Musclin含量的干预作用研究[J]. 邓玉强,唐智明.  浙江体育科学. 2012(02)
[4]PI3K-Akt信号传导通路对糖代谢的调控作用[J]. 迟毓婧,李晶,管又飞,杨吉春.  中国生物化学与分子生物学报. 2010(10)
[5]PPAR-γ及PGC-1的作用机制及基因多态性研究进展[J]. 赵丽荣,苏秀兰,陈良光,王立平.  内蒙古医学院学报. 2010(04)
[6]长期高脂饲养大鼠骨骼肌musclin表达上调及其与胰岛素抵抗的相关性[J]. 曹玲玲,袁莉,徐江祥,刘志强,王霞,张贝,邱海燕,徐国玲,唐兆生.  中华内分泌代谢杂志. 2009 (02)
[7]骨骼肌脂肪酸代谢与胰岛素抵抗[J]. 高宇,宋光耀.  中国老年学杂志. 2009(03)
[8]肌肉素干预大鼠骨骼肌葡萄糖摄取与NF-κB的相关性[J]. 刘英,宗志红,刘国良.  同位素. 2007(04)
[9]肌源干细胞研究进展[J]. 李俊玲,王世立,韩金祥.  中国生物工程杂志. 2007(05)
[10]葡萄糖转运蛋白4表达调节及与糖尿病的关系[J]. 曹永红,王长江.  中国临床保健杂志. 2007(01)

博士论文
[1]LXRs激动对PPARγ转录调节脂肪因子表达的作用及机制研究[D]. 郑芬萍.浙江大学 2011
[2]肌肉素（Musclin）对大鼠分化的成肌细胞葡萄糖摄取的影响及其分子机制的实验研究[D]. 刘英.中国医科大学 2008

硕士论文
[1]胰岛素信号通路中GLUT4的作用机制研究[D]. 高勇.浙江大学 2006



本文编号：3015362